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實(shí)驗(yàn)給藥組和模型組檢測蛋白和mRNA變化問題~~~
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本人在細(xì)胞水平研究某一藥物的抗氧化作用。分為正常組，模型組，低劑量組，中劑量組，高劑量組。 初步打算如下做： 細(xì)胞長到90%的時(shí)候傳代到六孔板中，50萬/孔。等培養(yǎng)24小時(shí)后，模型組，低劑量組，中劑量組，高劑量組同時(shí)給相應(yīng)的藥物，再過24小時(shí)后提取每個(gè)組中細(xì)胞的RNA，做半定量RT-PCR看看目的基因表達(dá)情況。我有幾個(gè)問題想各位做過類似實(shí)驗(yàn)的同仁們咨詢一下： 1. 細(xì)胞傳代后24小時(shí)給藥可不可以？有點(diǎn)晚嗎？是不是可以傳代12小時(shí)后再給藥？ 2.每個(gè)組是不是至少做3個(gè)平行組？這樣子才有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 3.像這種實(shí)驗(yàn)，細(xì)胞傳代后，細(xì)胞中mRNA什么時(shí)候開始大量轉(zhuǎn)錄？ 由于是第一次做這種實(shí)驗(yàn)，大家給點(diǎn)建議~~~謝謝！ |
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2樓2012-11-23 14:58:56
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