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蘇舒smile新蟲 (初入文壇)
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[求助]
關(guān)于脂肪氧合酶底物亞油酸的制備
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我現(xiàn)在在做肉制品的脂肪氧合酶 我的方法是 底物液準(zhǔn)備:140mg亞油酸溶于5ml含有180ul的吐溫20(Twen20)脫氧重蒸水中，該溶液用2N的NaOH調(diào)節(jié)pH在9.0到亞油酸完全溶解并且pH保持穩(wěn)定。然后用脫氧重蒸水定容到50ml。 活力測定:200μl亞油酸鈉底物與2.9ml pH為5.5的檸檬酸緩沖溶液混合，于20℃水浴中使其溫度快速均勻，待其在234nm處的吸光值穩(wěn)定后，加入0.lml酶液，迅速混合均勻于20℃、234nm處測其l min內(nèi)吸光度的增加量。1個酶活力單位表示為每分鐘每克蛋白質(zhì)吸光度增加1。 求各位高手指點下，我的亞油酸買回來時液體的，我怎么取1400MG呢？ 我的底物定容后PH為什么在11左右，我怎么調(diào)回到9.0 呢？ 最后酶活的計算方法。 請大家指點下脫氧重蒸水的制備方法 |
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lihaitao321
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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我做與大豆LOX相關(guān)的實驗，我的亞油酸也是液體，但是方法里面取的就是mL。或許你可以查下亞油酸的密度，計算下需要的體積。 底物最后pH不是9，可能是NaOH加得太多，調(diào)pH用鹽酸。 為什么你的酶活定義里面有蛋白質(zhì)？我的酶活單位定義是30℃、pH9.0下以亞油酸為底物的3mL反應(yīng)體系在234nm處每分鐘增加0.001吸光度為一個單位，實驗時取了1.5mL底物，所以計算公式是：吸光度增加值X1000X2X酶的稀釋倍數(shù)/（反應(yīng)時間X酶的體積），得出酶活是u/mL表示。我的底物和你的配置方法不同，所以我的公式僅供參考。 我的實驗沒有用脫氧水，所以結(jié)果會不準(zhǔn)確。但是據(jù)說制備有點麻煩。 希望對你有所幫助。 我也有個疑問，你的亞油酸加的量挺多的，你買的是什么樣的亞油酸，純度多少？99%的亞油酸還是很貴的，純度低了又怕影響實驗結(jié)果。有問題可以一起討論。 |
2樓2012-11-25 11:07:08
蘇舒smile
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4樓2012-11-25 16:55:25
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