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happyzxj718

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[求助] BCA檢測蛋白濃度負值怎么回事

蟲蟲們，最近用BCA試劑盒檢測溶液內蛋白含量，蛋白濃度應該很低，計算后濃度是負數呢，什么意思呀，求指點。急呀。

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【求助/交流】BCA法測蛋白濃度的疑問已經有3人回復
【求助/交流】關于BCA法測量蛋白質濃度。已經有20人回復

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1樓 2012-11-25 21:08:15

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cicelyzh

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【答案】應助回帖

★
感謝參與，應助指數 +1
wizardfan: 金幣+1, 謝謝分享經驗 2012-11-26 07:10:47

你是否做了樣品buffer的對照？buffer里有些成分可能造成吸光值下降。如果buffer的負值不是很大的情況下，你可以直接測定含有同樣量的buffer下的吸光值（假定為負），然后用測定樣品的吸光值扣除這個負對照，然后再根據標準曲線計算�；蛘撸阋部梢园炎鰳藴是€的BSA的樣品也加入同樣量的buffer。祝你好運！

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2樓2012-11-26 05:37:02

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weigh1111

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【答案】應助回帖

感謝參與，應助指數 +1

是不是你用的標準曲線或者參比不太對哦……要是你參比用錯了的話，比如參比有挺高的吸收的話，會拉低你的樣品吸光度，算出來就可能是負值

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3樓2012-11-26 08:18:00

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happyzxj718

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引用回帖:

2樓: Originally posted by cicelyzh at 2012-11-26 05:37:02
你是否做了樣品buffer的對照？buffer里有些成分可能造成吸光值下降。如果buffer的負值不是很大的情況下，你可以直接測定含有同樣量的buffer下的吸光值（假定為負），然后用測定樣品的吸光值扣除這個負對照，然后再根 ...

謝謝你的回復。我用的碧云天的試劑盒，按照說明書步驟來做的，標曲R2在0.96左右。蛋白濃度低會不會出現負值這種情況呢

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4樓2012-11-26 19:22:19

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happyzxj718

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引用回帖:

3樓: Originally posted by weigh1111 at 2012-11-26 08:18:00
是不是你用的標準曲線或者參比不太對哦……要是你參比用錯了的話，比如參比有挺高的吸收的話，會拉低你的樣品吸光度，算出來就可能是負值

你好，謝謝你的回復。我實驗的標準曲線R2在0.96左右。蛋白濃度很低，最低的可能小于1ug/ml.會不會不能檢測到呢

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5樓2012-11-26 19:25:50

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cicelyzh

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【答案】應助回帖

引用回帖:

4樓: Originally posted by happyzxj718 at 2012-11-26 19:22:19
謝謝你的回復。我用的碧云天的試劑盒，按照說明書步驟來做的，標曲R2在0.96左右。蛋白濃度低會不會出現負值這種情況呢...

一般做標準曲線是用BSA溶解在水里的，你蛋白樣品的buffer往往有蔗糖啊或者其他還原性物質來保護蛋白，BCA對這些比其他方法要敏感。我不知道具體你的樣品是溶在什么buffer里的，所以不好定論。但是你一定要檢測一下樣品BUFFER在檢測方法下是否為0，這是所有定量蛋白濃度方法所必需的。

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6樓2012-11-27 07:02:47

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lynet

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不是調零沒調好呀？我之前也是試過這樣，再重新調一次零，就沒負值了。

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7樓2012-11-27 09:03:35

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ljsh

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蛋白濃度低于試劑盒檢測下限

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8樓2012-11-27 11:29:25

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happyzxj718

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引用回帖:

6樓: Originally posted by cicelyzh at 2012-11-27 07:02:47
一般做標準曲線是用BSA溶解在水里的，你蛋白樣品的buffer往往有蔗糖啊或者其他還原性物質來保護蛋白，BCA對這些比其他方法要敏感。我不知道具體你的樣品是溶在什么buffer里的，所以不好定論。但是你一定要檢測一下 ...

萬分感激

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9樓2012-11-27 21:49:30

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happyzxj718

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7樓: Originally posted by lynet at 2012-11-27 09:03:35
不是調零沒調好呀？我之前也是試過這樣，再重新調一次零，就沒負值了。

謝啦，我重新調零

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10樓2012-11-27 21:50:11

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