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zitengluo金蟲 (小有名氣)
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[求助]
求助！比色法測甾體總皂苷的問題
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做著與實驗室主流方向完全不同的課題，哎，源于老板接的一個項目，現(xiàn)在實驗室也沒什么人能指導(dǎo)，真是可憐的孩紙 閑話少說吧，直奔主題 在做提取中草藥里面的甾體總皂苷，想初步篩選條件，所以選用了比色法來測提取的甾體總皂苷，以含量較多的母體——薯蕷皂苷元作為對照物，通過這陣子查找文獻，篩選方法后，選用了茴香醛-濃硫酸的顯色方法，找到了1977年的源頭文獻，具體步驟都是按照那上面來的，揮干溶劑后加入乙酸乙酯溶解樣品，再加入試劑A（0.5%的茴香醛乙酸乙酯溶液）和試劑B（濃硫酸：乙酸乙酯=1：1（v:v））各1 ml，在60 ℃溫浴20 min，然后在室溫冷卻10 min后測定在430 nm處的吸收，以不加樣品為試劑空白 現(xiàn)在有幾個問題想請教： 首先就是這個顯色反應(yīng)的原理，想知道具體生成了什么，雖然有文獻說是F環(huán)破裂反應(yīng)，但是想知道具體的 試劑空白顯紅色，本身的吸收有點大，到了0.9（相對于空氣）左右，雖然被扣除吸收，但是我感覺這會導(dǎo)致樣品的吸收很大，導(dǎo)致結(jié)果不是很準(zhǔn)，不是說吸光度1一下才比較準(zhǔn)確嘛，而且我測試實際樣品的時候讀數(shù)不是很穩(wěn)定 還有個人覺得顯色反應(yīng)不穩(wěn)定，吸光度是一直在增加，樣品和空白都顏色不斷加深，有試過冰浴，但是感覺效果不明顯，不知道有什么方法可以停止顯色反應(yīng)，讓讀數(shù)穩(wěn)定呢？ 不知道大家有什么好的建議沒？有誰做過這個反應(yīng)能給點指導(dǎo)更好啦，親們，不要建議用色譜法之類的，我只能考慮分光光度計法，實驗室條件有限 我上傳原始文獻給大家瞄瞄吧 |
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2012-11-26 22:38:26, 673.11 K
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金蟲 (小有名氣)
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2樓2012-11-27 11:29:46
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