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onlycwt銅蟲 (小有名氣)
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[求助]
EDC/NHS活化金電極-硫醇后抗體固定不上
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最近在做生物傳感器，按照如下步驟進(jìn)行，但不知為什么抗體修飾不上去，請(qǐng)大俠幫我看看哪里有問(wèn)題： 1、預(yù)處理金電極：化學(xué)拋光+電化學(xué)拋光 2、10毫摩 11-巰基十一烷酸乙醇溶液中避光浸泡3小時(shí) 3、75mM/15mM EDC/NHS水溶液浸泡1小時(shí) 4、電極自然晾干后滴加20uL 0.5mg/ml BSA水溶液，封裝好在37°下反應(yīng)1小時(shí)或4°下12小時(shí)（暫時(shí)用便宜的BSA代替抗體，看能不能修飾上） 5、將電極輕輕浸入雙蒸水1分鐘，取出后測(cè)試 -------------------------------------------------------------------- 不知道為什么就是不能修飾上去，EDC/NHS 活化那步電阻變小很多，跟文獻(xiàn)相符，但不知帶是否活化成功。 請(qǐng)幫忙看看哪里出了問(wèn)題  |
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 羧基活化EDC|DCC,NHS | 金納米棒及修飾 | 金電極 | 電化學(xué) |
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onlycwt
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4樓2012-11-27 21:23:42
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2樓2012-11-27 20:55:17
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【答案】應(yīng)助回帖
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onlycwt: 金幣+5 2012-11-27 21:19:18
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硫醇在Au表面的自組裝方法雖已使用20年了，看似簡(jiǎn)單，但要獲得滿意的單分子膜卻不是想象的那么容易。這個(gè)自組裝過(guò)程中最關(guān)鍵的要素是保證Au表面的干凈（無(wú)污染），其它的都很簡(jiǎn)單。因此，你如果是Au棒（不是Au薄膜）電極，出來(lái)起來(lái)就大膽些，采用強(qiáng)氧化(濃H2SO4+H2O2, 80C, 超聲5-10min)，水清洗后，乙醇洗，馬上放入硫醇中，盡量避免Au與污濁的空氣接觸，組裝時(shí)間過(guò)夜更好。 不要忙于下一步，首先應(yīng)該檢測(cè)自組裝效果，最好用鐵氰化鉀的CV法（阻抗譜）測(cè)試，可以后，表面這種預(yù)處理方法有效，以后采用。 然后，再重復(fù)一次，或幾次，再往下走。 |
3樓2012-11-27 21:03:59
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onlycwt: 金幣+7, ★★★很有幫助 2012-11-28 20:52:18
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onlycwt6樓2012-11-28 11:48:53
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