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求翻譯SRB和MTT操作
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本人化學，為了發(fā)文章，但是生物方面的實驗操作寫不好，有誰寫過SRB實驗和MTT實驗，幫我寫下，包括前面如何培養(yǎng)細胞（發(fā)過這方面文章的應該知道滴�。�，下面是實驗具體操作，寫的連貫些，如果你曾經(jīng)寫過SRB和MTT，復制給我就好了，你懂滴！ A、SRB assay （1）采用細胞株：用人肝癌7721細胞； （2）將對數(shù)生長期的細胞消化后，吹打成單細胞懸液，接種于96孔培養(yǎng)板；5x103細胞/孔，每孔培養(yǎng)基200μL，370C、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過夜； （3）待細胞貼壁后，加入適當濃度(100, 20, 4, 0.8, 0.16μM)的受試化合物和陽性對照藥在培養(yǎng)箱中再培養(yǎng)3d； （4）10%三氯醋酸固定1h； （5）用雙蒸水洗滌，干燥后，每孔加入70μL SRB溶液（4mg/mL），室溫染色20min，1%醋酸洗滌，干燥； （6）每孔加入100μL 10 mM Tris-Base溶液使SRB溶解； （7）酶標儀檢測各孔OD值（檢測波長：515nm），記錄結果，按下列公式計算抑制率：抑制率（%）=(OD對照－OD給藥)/ OD對照 × 100%，并計算IC50。如果受試物的IC50小于陽性對照藥物的IC50，則視為可做效果優(yōu)于陽性對照藥的化合物。 B、MTT assay （1）采用細胞株：人白血病HL-60細胞； （2）將對數(shù)生長期的細胞消化后，吹打成單細胞懸液，接種于96孔培養(yǎng)板；5x103細胞/孔，每孔培養(yǎng)基100μL，370C、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過夜； （3）加入適當濃度(100, 20, 4, 0.8, 0.16μM)的受試化合物和陽性對照藥在培養(yǎng)箱中再培養(yǎng)3d； （4）加入5 mg/mL的MTT液（20μL/孔），繼續(xù)培養(yǎng)4h； （5）吸出孔內培養(yǎng)液后，加入DMSO液（100μL/孔），將培養(yǎng)板置于微孔板扳蕩器上振蕩10min，使結晶物溶解； （6）酶標儀檢測各孔OD值（檢測波長：570 nm）；記錄結果；按下列公式計算抑制率：抑制率（%）=(OD對照－OD給藥)/ OD對照 × 100%； （7）如果受試物的半數(shù)抑制濃度（IC50）小于陽性對照藥，則視為可做效果優(yōu)于陽性對照藥的化合物。 |
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