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血小板釋放5-羥色胺
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請(qǐng)問：測定血小板釋放的5-羥色胺操作步驟中，后續(xù)的步驟中，請(qǐng)?jiān)敿?xì)解答一下各操作的作用，萬分的感謝，不了解操作步驟中加入的試劑的用途或作用，望大家不吝賜教，感激涕零。 "取大鼠分離得PRP, PRP（富血小板）給藥三分鐘后，然后加入膠原30ULcollagen，誘導(dǎo)反應(yīng)5min，加入50uM的吲哚美辛20ul，于冰浴中終止反應(yīng)，聚集后的PRP200r/min離心5min，取上清液于-20℃保存，按試劑盒說明測定TXB2的含量。" 上述中加吲哚美辛的作用及原因？ 按常規(guī)方法制備PRP和PPP。加誘導(dǎo)劑作用5min后離心（1200g，100min），取上清液聚集后的PRP。分別取0.4mlPRP、PPP和聚集后PPP與0.1ml0.5%tritonX-100混合，然后加入3ml酸化正丁醇，振蕩混勻。離心（1200g，5min）。取有機(jī)相2.5ml，加入正庚烷5ml，0.1%半胱氨酸1ml，振蕩混勻，離心（1200g，5min）。棄去有機(jī)相，取水相0.5ml，加入0.004%OPT溶液3ml，置沸水浴15min，冷卻后以熒光光度計(jì)測定熒光強(qiáng)度（激發(fā)365nm，發(fā)射光480nm）。 取大鼠分離得PRP, PRP（富血小板）給藥三分鐘后，然后加入膠原30ULcollagen，誘導(dǎo)反應(yīng)5min，反應(yīng)混合液 500 g離心 10 min， 取上清 0.3 mL為測定樣品，并平行測定 0.3 mL 0.5 mg/L 5-HT 標(biāo)準(zhǔn)溶液熒光數(shù)據(jù)。各實(shí)驗(yàn)管分別依次加入 TTBSA 0.7 mL 及 100% 三氯乙酸 0.3 mL 混勻， 1 500 g 離心 20 min， 取上清 0.5 mL， 各加入 OPT/HCI液 2 mL 混勻， 沸水浴煮10 min， 冰水冷卻 10 min， 各加三氯甲烷 2 mL 混勻，1 500 g離心 20 min， 各取上清 1 mL 測定熒光。 上述紅色標(biāo)記的物質(zhì)的作用及原因？ 請(qǐng)了解的予與解答，萬分感謝 [ Last edited by dylfgs on 2012-12-4 at 19:28 ] |
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2樓2013-06-03 05:03:19
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