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sunny_0211銀蟲 (初入文壇)
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[求助]
【求助/交流】擬南芥保衛(wèi)細(xì)胞原生質(zhì)體RNA提取電泳圖，出現(xiàn)反向彌散？ 已有1人參與
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我需要先對(duì)擬南芥保衛(wèi)細(xì)胞提取原生質(zhì)體，需要大概5小時(shí)左右，然后加入Trozol試劑，氯仿去蛋白，異丙醇沉淀，測(cè)RNA含量在4000ng/ul左右，但是甲醛變型膠電泳無(wú)條帶，或是出現(xiàn)5S條帶。 請(qǐng)問(wèn)是RNA降解了嗎？還是我就沒(méi)提取出來(lái)？前期的酶解提取原生質(zhì)體過(guò)程較長(zhǎng)。對(duì)后續(xù)提取RNA是否產(chǎn)生了影響？ 本人計(jì)劃提取RNA用于文庫(kù)構(gòu)建，一直不能解決RNA提取的問(wèn)題，十分著急，希望做過(guò)這方面實(shí)驗(yàn)的同學(xué)、老師、專家能夠給予寶貴意見(jiàn)，不勝感激 PS：有時(shí)候點(diǎn)樣孔反向出現(xiàn)彌散狀條帶，于是反向電泳出現(xiàn)一條亮帶，這是什么情況？ FX-RNA_副本.jpg RNA1_副本.jpg RNA25min.jpg |
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cicelyzh
鐵桿木蟲 (職業(yè)作家)
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2樓2012-12-01 09:09:03
weigh1111
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3樓2012-12-01 13:22:31
sunny_0211
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4樓2012-12-09 23:52:49
sunny_0211
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5樓2012-12-09 23:56:56
麥戈桑默
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【答案】應(yīng)助回帖
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我提取的也總是降解， 所用的器皿也用DEPC水泡過(guò)，過(guò)程如下：收菌以后用生工家的trizol懸浮菌體，液氮研磨，每1mltrizol 0.2ml氯仿的量加入氯仿，手搖混勻2min,在室溫下（15℃～30℃）放置2～3分鐘后，12000g4℃離心10分鐘。取上層水相置于新EP管中，加等體積l異丙醇。放置20分鐘，12000g4℃離心10分鐘。 棄上清，按照每管加1ml 75%乙醇進(jìn)行洗滌，12000g4℃離心5分鐘，棄上清；讓沉淀的RNA在室溫下自然干燥； 用DEPC熏蒸過(guò)的水溶解RNA沉淀。 我的電泳槽也用DEPC水泡過(guò) |
6樓2013-04-24 10:43:57
落葉的軌跡
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7樓2015-07-23 11:05:03
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