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why0393金蟲 (正式寫手)
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[求助]
復(fù)蘇培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞失�。。�！
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有沒有做單抗的蟲子？本實驗室年前保存在液氮的的雜交瘤細(xì)胞現(xiàn)在怎么復(fù)蘇都無法存活超過兩天！細(xì)胞在瓶子里就是不長，而是慢慢的萎縮死亡。這是怎么回事？ PS：在保存的時候才發(fā)現(xiàn)保存用的血清是污染的血清。對復(fù)蘇后的細(xì)胞離心清洗兩次，外加雙抗仍然無法存活。求高手指點 |
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2樓2012-12-06 10:39:25
3樓2012-12-06 11:30:01
why0393
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4樓2012-12-06 17:03:59
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5樓2012-12-06 17:06:03
【答案】應(yīng)助回帖
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雜交瘤細(xì)胞復(fù)蘇本來就是沒有細(xì)胞系后復(fù)蘇，也做雜交瘤細(xì)胞，并且遇到同樣的問題，但是經(jīng)過一段時間的摸索后來將細(xì)胞也全部復(fù)蘇存活。 這個很大程度上是細(xì)胞凍存的問題，凍存液、凍存溫度等等，很多實驗室喜歡將細(xì)胞直接放在-80度冰箱中，這個保存時間很有限，一般三個月復(fù)蘇都存在問題，放在液氮中就好多了， 復(fù)蘇是注意幾個問題：細(xì)胞密度，太稀少的話很難活下來，培養(yǎng)中發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞密度越大細(xì)胞分裂越快，有文獻(xiàn)報道，可能會依賴自身分泌的某些物質(zhì)生長；合理把握換液時間；最好采用24孔板復(fù)蘇，注意培養(yǎng)基配方，需要優(yōu)化配方等等。祝好 |
6樓2012-12-06 19:18:41
why0393
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7樓2012-12-06 20:57:58
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