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hany1234銅蟲 (小有名氣)
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[求助]
農(nóng)桿菌如何幫助重組質(zhì)粒整合到植物染色體上？
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| 利用農(nóng)桿菌侵染植物，農(nóng)桿菌如何將重組質(zhì)粒整合到植物染色體上，重組質(zhì)粒的導(dǎo)入會不會影響植物染色體本身的表達(dá)，比如插入到某些基因中，使某些基因不能正常表達(dá) |
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【答案】應(yīng)助回帖
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amisking: 回帖置頂 2012-12-06 20:08:51
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1949stone: MolEPI+1, very good 2012-12-07 07:33:26
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1 利用農(nóng)桿菌侵染植物，農(nóng)桿菌如何將重組質(zhì)粒整合到植物染色體上 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)外源基因基本原理： 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化系統(tǒng)是一種天然的基因轉(zhuǎn)化系統(tǒng)。農(nóng)桿菌分為根瘤農(nóng)桿菌和發(fā)根農(nóng)桿菌。根瘤農(nóng)桿菌中含有腫瘤誘導(dǎo)（T)質(zhì)粒,Ti質(zhì)粒上含有可轉(zhuǎn)移 DNA(T-DNA)區(qū)、毒性區(qū)(Vir區(qū))以及冠癭堿代謝基因編碼區(qū)。T-DNA兩端是兩個25 bp的重復(fù)序列， 分別稱為左邊界和右邊界,兩個邊界序列之間是生 長素和細(xì)胞分裂素合成基因以及冠癭堿合成基因。 Vir區(qū)中也含有多個基因段，如FiM、FirB、FirC、 VirD.、VirE、VirG、VirH等，每個基因段都含有多個基因。當(dāng)植物受到傷害時,分泌含有酚類化合物的汁液,這些酚類化合物一方面通過染色體毒性基因 (chvA、chvB等介導(dǎo)的趨化性促使農(nóng)桿菌向植物受傷部位移動并附著于植物細(xì)胞表面;另一方面則被Ti質(zhì)粒上由VirA和VirG組成的雙組分調(diào)節(jié)系統(tǒng)識別,從而誘導(dǎo)其他Vir的表達(dá)。VirD1和VirD2共同作用，由T-DNA右邊界開始向左邊界切割產(chǎn)生 —條T-DNA單鏈，并與Vir其它表達(dá)蛋白結(jié)合成復(fù)合體轉(zhuǎn)移到農(nóng)桿菌外,然后進(jìn)入細(xì)胞到達(dá)細(xì)胞核內(nèi)并整合到細(xì)胞染色體上。 T-DNA的轉(zhuǎn)移只與兩個邊界序列有關(guān)，尤其右邊界對T-DNA的準(zhǔn)確轉(zhuǎn)移是不可缺少的，而邊界序列之間含有什么基因并不影響T-DNA的轉(zhuǎn) 移。因此，可以用外源基因代替T-DNA區(qū)內(nèi)的基因，進(jìn)而利用農(nóng)桿菌將這個改造后的T-DNA轉(zhuǎn)移 到植物基因組中，這樣就可以獲得所希望得到的轉(zhuǎn)基因植株。隨著對農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化系統(tǒng)的了解不斷深 入,人們對Ti質(zhì)粒進(jìn)行了多種方式的改造,使載體系統(tǒng)不斷更新，轉(zhuǎn)化效率逐漸成熟，應(yīng)用范圍越來越廣泛。 2. 重組質(zhì)粒的導(dǎo)入會不會影響植物染色體本身的表達(dá)，比如插入到某些基因中，使某些基因不能正常表達(dá) 肯定是會的，比如現(xiàn)在有很多的T-DNA插入突變體，就是利用T-DNA插入到基因中間導(dǎo)致基因失活，從而制備出突變體。 因此， 如果你是做基因過表達(dá)，最好是篩選兩柱以上，T-DNA插在基因組不同位置，但能重復(fù)同一表型的 如果你是做基因敲除，你也要選兩柱以上，插在同一基因內(nèi)但在不同位置，表型一致 |
2樓2012-12-06 16:43:05
hany1234
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3樓2012-12-06 18:38:17
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【答案】應(yīng)助回帖
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1949stone: 非常喜歡這樣的 2012-12-07 08:09:33
hany1234: 金幣+5, ★★★很有幫助, 兄臺 兩個問題都是你回答的哈 給力 雖然還是有點小疑惑 還是很感謝:) 2012-12-07 12:40:06
1949stone: 非常喜歡這樣的 2012-12-07 08:09:33
hany1234: 金幣+5, ★★★很有幫助, 兄臺 兩個問題都是你回答的哈 給力 雖然還是有點小疑惑 還是很感謝:) 2012-12-07 12:40:06
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T-DNA插入是不定點，在染色體上隨機插入，但是也是有一點偏好性，比如在染色體著絲粒處插入的概率可能就會小一些，而且T-DNA在染色體上的插入方向也不定 “隨機插入的話，情況就復(fù)雜了 還有你最后說的兩種情況 讓T-DNA插在基因組不同位置 怎么插入不同個位置啊” 隨機插入的話，為什么會復(fù)雜啊，讓T-DNA插在基因組不同位置，你是不同控制的，真是因為其隨機插入，所以找到兩個植株插入點不再同一位置還是很容易的，你做轉(zhuǎn)基因植物不只是就做一株出來，用southern blot一篩選，就出來了 |
4樓2012-12-06 19:08:14
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