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[交流] 帶GFP的重組表達(dá)載體，GFP蛋白會(huì)不會(huì)影響目的基因表達(dá)的蛋白？

在用EGFP質(zhì)粒連接目的基因構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒研究某基因的功能時(shí)，GFP蛋白會(huì)不會(huì)影響目的基因表達(dá)的蛋白的結(jié)構(gòu)和功能？或者影響有多大？

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1樓 2012-12-16 16:59:47

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pennchem

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小丹木木: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流 2012-12-17 15:29:43

（1）最好的辦法是純化出來(lái)，做活性檢測(cè)對(duì)比，這樣最直接
（2）否則加足夠長(zhǎng)的linker，做一個(gè)實(shí)驗(yàn)把GFP放在N-端，另一個(gè)放在C-端，再做GFP作為陰性的對(duì)照
（3）有的GPF是可以形成多聚體的，如果是這樣的質(zhì)粒，需要做一些點(diǎn)突變，這樣就可以得到單體的GFP，依然有熒光。

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10樓2012-12-17 10:02:26

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timmychina

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flag肯定會(huì)影響目的蛋白的一些性質(zhì)，但可以忽略其影響。標(biāo)簽要連載目的蛋白的C端。

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7樓2012-12-17 09:45:04

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sarah-miao

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應(yīng)該不會(huì)，我也在做這個(gè)，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)初期就是想通過(guò)GFP來(lái)檢測(cè)基因表達(dá)的，所以影響不會(huì)很大，但是之前在做細(xì)胞系的時(shí)候想到加個(gè)報(bào)告基因，但是老板說(shuō)因?yàn)橐⒎€(wěn)定的細(xì)胞系，所以加報(bào)告基因不好，然后就是傳統(tǒng)的RT，WB檢測(cè)了

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2樓2012-12-16 21:38:57

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1514132

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應(yīng)該是沒(méi)什么事的

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3樓2012-12-16 22:11:14

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readytogo

榮譽(yù)版主 (文學(xué)泰斗)

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估計(jì)不會(huì)吧，有個(gè)師弟做這個(gè)

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4樓2012-12-16 22:13:13

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lostdipper

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有的蛋白臉上后會(huì)影響蛋白折疊從而影響功能的

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6樓2012-12-16 22:35:41

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jl860822

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這個(gè)沒(méi)有人做過(guò)研究，樓主可以做個(gè)實(shí)驗(yàn)試一下，沒(méi)準(zhǔn)可以發(fā)文章呢

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12樓2012-12-18 19:41:04

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hemabaobao

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距離太緊肯定會(huì)影響

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13樓2012-12-19 01:05:52

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fuding6

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凡事都要去實(shí)踐了才能知道結(jié)果

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14樓2012-12-19 10:47:10

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融合表達(dá)一般會(huì)有一些影響，有些表達(dá)更高，有些表達(dá)變低。

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16樓2013-08-02 10:29:09

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珍真善美

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我也想知道這個(gè)問(wèn)題，請(qǐng)問(wèn)樓主最終怎么做的

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17樓2014-09-12 18:06:43

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yww2012

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個(gè)人感覺(jué)10樓說(shuō)的有道理，兩種蛋白會(huì)不會(huì)相互影響，需看具體在什么樣的條件下。

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18樓2014-09-18 11:08:59

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查無(wú)此人lyp

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應(yīng)該是會(huì)影響的，畢竟GFP蛋白20多呢，不小

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19樓2015-03-20 10:38:02

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moon流風(fēng)

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有可能。因?yàn)镚FP有20多kd。確定會(huì)不會(huì)有影響，做互補(bǔ)實(shí)驗(yàn)。

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20樓2015-05-06 15:34:55

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ddtao

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建議用Polycysteine-dendritic poly(His,Arg)1:5試一試
http://www.novel-polylysine.com/main/home/htm.php?nowmenuid=2
huiyisu@126.com

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21樓2016-04-02 12:50:20

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簡(jiǎn)單回復(fù)

yaoyao1455樓

2012-12-16 22:17 回復(fù)

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2012-12-17 09:54 回復(fù)

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xiaofuyu9樓

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2012-12-17 10:04 回復(fù)

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