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以BSA和RNA為鍵合配體的樹枝狀大分子修飾的開管毛細(xì)管電色譜柱的制備
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毛細(xì)管電色譜(capillary electrochromatography，CEC)是一種微柱分離技術(shù)，它結(jié)合了毛細(xì)管區(qū)帶電泳(capillary zone electrophoresis，CZE)的高效性和高效液相色譜(HPLC)高選擇性的優(yōu)點(diǎn)，具有高效、快速、微量的特點(diǎn)。OT．CEC中沒有塞子、填料和渦流擴(kuò)散，因此避免了塞子效應(yīng)、焦耳熱、氣泡等一系列困擾PC．CEC的問題。而且OT—CEC可采用較短的柱子，實(shí)現(xiàn)快速高效的分離。 在以前研究的基礎(chǔ)上，以3一氨丙基三乙氧基硅烷做硅烷化試劑，丙烯酸甲酯為馬氏加成試劑，乙二胺為酰胺化試劑，通過多次重復(fù)馬氏加成反應(yīng)、酰胺化反應(yīng)，在毛細(xì)管內(nèi)壁成功鍵合了聚酰胺一胺(PAMAM，晨源)樹枝狀大分子，制得了l代、2代、3代PAMAM修飾的開管毛細(xì)管電色譜柱。 在不同代數(shù)PAMAM修飾的開管毛細(xì)管電色譜柱的內(nèi)壁進(jìn)一步鍵合BSA配體，獲得了以樹枝狀大分子PAMAM為間隔臂，BSA為配體的新型親和毛細(xì)管電色譜柱，采用熒光標(biāo)記法對(duì)所合成的BSA修飾的開管毛細(xì)管電色譜柱進(jìn)行了表征。利用此親合電色譜柱，成功分離了DL色氨酸。結(jié)果顯示了以樹枝狀大分子做間隔臂的毛細(xì)管電色譜柱比直接在硅烷化試劑上鍵合BSA的毛細(xì)管電色譜柱具有明顯的分離優(yōu)勢(shì)。同時(shí)，嘗試分離了卵清蛋白，獲得了較好的效果。 在前期工作的基礎(chǔ)上，在不同代數(shù)PAMAM修飾的開管毛細(xì)管電色譜柱內(nèi)壁鍵合RNA配體，獲得了以樹枝狀大分子PAMAM為間隔臂，RNA為配體的新型親和毛細(xì)管電色譜柱，并對(duì)不同代數(shù)PAMAM修飾的色譜柱對(duì)溶菌酶和核糖核酸酶A的分離進(jìn)行了比較。結(jié)果顯示，在最優(yōu)化條件下，以三代PAMAM為間隔臂，RNA為配體的色譜柱的分離效果最好。同時(shí)，在最佳條件下，成功地分離了β-酪蛋白和α-乳白蛋白。 |
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