版塊導(dǎo)航: 正在加載中...

應(yīng)《網(wǎng)絡(luò)安全法》要求，自2017年10月1日起，未進(jìn)行實(shí)名認(rèn)證將不得使用互聯(lián)網(wǎng)跟帖服務(wù)。為保障您的帳號(hào)能夠正常使用，請(qǐng)盡快對(duì)帳號(hào)進(jìn)行手機(jī)號(hào)驗(yàn)證，感謝您的理解與支持！

24小時(shí)熱門版塊排行榜

北京石油化工學(xué)院2026年研究生招生接收調(diào)劑公告

返回列表

hzjlan

銀蟲 (小有名氣)

應(yīng)助: 1 (幼兒園)
金幣: 593
紅花: 1
帖子: 78
在線: 20.8小時(shí)
蟲號(hào): 860888
注冊(cè): 2009-09-30
專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能

【答案】應(yīng)助回帖

引用回帖:

35樓: Originally posted by 清風(fēng)寨 at 2012-12-21 08:33:48
2A是兩個(gè)A堿基么？...

不是啊2A也是一段DNA序列，好像有F2A、T2A等，aagattgtggcccctgtgaagcagaccctgaactttgacctgctgaagctggctggcgatgtggagtccaaccctggcccc這是一段F2A的序列，在細(xì)胞內(nèi)翻譯出的蛋白會(huì)在2A的地方被切開，所以就得到兩個(gè)不同的蛋白了

贊一下

回復(fù)此樓

» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）

清風(fēng)寨

41樓2012-12-21 20:47:12

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

清風(fēng)寨

銀蟲 (小有名氣)

MolEPI: 1
應(yīng)助: 5 (幼兒園)
金幣: 287.8
散金: 3
紅花: 2
帖子: 273
在線: 33.4小時(shí)
蟲號(hào): 1391365
注冊(cè): 2011-09-05
專業(yè): 細(xì)胞生物學(xué)研究中的新方法

送鮮花一朵

引用回帖:

41樓: Originally posted by hzjlan at 2012-12-21 20:47:12
不是啊2A也是一段DNA序列，好像有F2A、T2A等，aagattgtggcccctgtgaagcagaccctgaactttgacctgctgaagctggctggcgatgtggagtccaaccctggcccc這是一段F2A的序列，在細(xì)胞內(nèi)翻譯出的蛋白會(huì)在2A的地方被切開，所以就得到兩個(gè)不 ...

thanks

回復(fù)此樓

冷風(fēng)過心變熱

42樓2012-12-21 21:49:47

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

清風(fēng)寨

銀蟲 (小有名氣)

MolEPI: 1
應(yīng)助: 5 (幼兒園)
金幣: 287.8
散金: 3
紅花: 2
帖子: 273
在線: 33.4小時(shí)
蟲號(hào): 1391365
注冊(cè): 2011-09-05
專業(yè): 細(xì)胞生物學(xué)研究中的新方法

引用回帖:

那你知道如果一個(gè)基因沒有終止子會(huì)影響這個(gè)基因的表達(dá)么

贊一下

回復(fù)此樓

冷風(fēng)過心變熱

43樓2012-12-21 21:51:24

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

hzjlan

銀蟲 (小有名氣)

應(yīng)助: 1 (幼兒園)
金幣: 593
紅花: 1
帖子: 78
在線: 20.8小時(shí)
蟲號(hào): 860888
注冊(cè): 2009-09-30
專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能

【答案】應(yīng)助回帖

引用回帖:

43樓: Originally posted by 清風(fēng)寨 at 2012-12-21 21:51:24
那你知道如果一個(gè)基因沒有終止子會(huì)影響這個(gè)基因的表達(dá)么...

如果用2A，前面的蛋白肯定不能帶終止子，直接轉(zhuǎn)譯出一個(gè)融合蛋白，然后細(xì)胞內(nèi)的機(jī)制會(huì)自動(dòng)在2A的地方把融合蛋白切開，但兩個(gè)蛋白的氨基酸序列沒有變化，可能會(huì)帶有一點(diǎn)2A的殘基，但那個(gè)不影響；如果是IRES，前一個(gè)蛋白要帶終止子，這樣前一個(gè)蛋白才可以得到，不然只能得到一個(gè)融合蛋白跟后一個(gè)蛋白。

贊一下

回復(fù)此樓

44樓2012-12-22 00:30:59

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

jl860822

金蟲 (正式寫手)

MolEPI: 1
應(yīng)助: 176 (高中生)
金幣: 689.1
散金: 800
紅花: 5
帖子: 617
在線: 79.1小時(shí)
蟲號(hào): 1863997
注冊(cè): 2012-06-19
性別: GG
專業(yè): 生物化學(xué)

【答案】應(yīng)助回帖

感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1

應(yīng)該都可以表達(dá)，但是可能會(huì)影響二者的高級(jí)結(jié)構(gòu)，他們可能不能正常折疊

贊一下

回復(fù)此樓

45樓2012-12-22 10:57:23

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

alicelchf

木蟲 (著名寫手)

MolEPI: 1
應(yīng)助: 53 (初中生)
金幣: 2393.2
散金: 134
紅花: 36
帖子: 2276
在線: 412.1小時(shí)
蟲號(hào): 1279368
注冊(cè): 2011-04-27
性別: MM
專業(yè): 蛋白質(zhì)組學(xué)

【答案】應(yīng)助回帖

★ ★ ★ ★ ★
清風(fēng)寨: 金幣+5, ★★★很有幫助 2012-12-23 15:45:35

一個(gè)Promoter可以控制多個(gè)蛋白的轉(zhuǎn)錄。但控制多長要看Promoter的強(qiáng)度，在PKS的基
因中，一個(gè)promoter控制多個(gè)蛋白的表達(dá)是很正常。
stop codon是在翻譯這個(gè)環(huán)節(jié)來決定蛋白的終止跟promoter控制的轉(zhuǎn)錄是分子生物學(xué)中兩個(gè)不同的事件。promoter負(fù)責(zé)DNA變成mRNA的，如果如夠強(qiáng)的promoter,使連續(xù)3-5個(gè)基因發(fā)生轉(zhuǎn)錄是一點(diǎn)問題都沒有的。
比如 pET28,
我們?cè)贜deI和XhoI位點(diǎn)克隆一個(gè)基因，在基因的后面引入一個(gè)SpeI位點(diǎn)，將另一個(gè)已
經(jīng)在pET28的基因用XbaI和SpeI切下來克隆到前一個(gè)克隆的SpeI位點(diǎn)上。兩個(gè)基因先后promoter T7控制。但是每個(gè)基因有自己的RBS(ribosome binding site）和stop Codon,在翻譯的時(shí)候核糖體會(huì)識(shí)別這一頭一尾兩個(gè)位點(diǎn)，表達(dá)出兩個(gè)蛋白。強(qiáng)度肯定是越排在后面的越弱，但是每個(gè)蛋白翻譯的速率和半衰期不一樣，表達(dá)出的量也不同。

贊一下(2人)

回復(fù)此樓

修身、齊家、治國、平天下

46樓2012-12-23 09:33:27

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

ghqiu2005

新蟲 (初入文壇)

應(yīng)助: 1 (幼兒園)
金幣: 1077.6
帖子: 12
在線: 159.5小時(shí)
蟲號(hào): 2182545
注冊(cè): 2012-12-12
專業(yè): 細(xì)胞生物學(xué)研究中的新方法

【答案】應(yīng)助回帖

在設(shè)計(jì)表達(dá)載體的時(shí)候，必須注意，不可改變第二個(gè)基因的讀碼框，否則，表達(dá)出來的就不是原來的蛋白質(zhì)了。

贊一下

回復(fù)此樓

47樓2012-12-23 10:05:05

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

lanhaizhixin

木蟲 (著名寫手)

應(yīng)助: 4 (幼兒園)
金幣: 2665.9
散金: 1881
紅花: 26
帖子: 1087
在線: 325.1小時(shí)
蟲號(hào): 911616
注冊(cè): 2009-11-24
專業(yè): 信息理論與信息系統(tǒng)

同一個(gè)啟動(dòng)子的情況下，多個(gè)基因串聯(lián)起來，說是可以，不過越是下游的基因表達(dá)越是微弱。
這里是賴良學(xué)通訊的一篇文章，作者制作了一種帶有紅綠黃藍(lán)四種熒光的轉(zhuǎn)基因豬。

****直接將四種熒光基因表達(dá)載體同時(shí)轉(zhuǎn)入宿主（也就是豬體細(xì)胞，比如成纖維細(xì)胞）。這種最直接、最簡單的方案可以使得四種載體同時(shí)存在宿主內(nèi)，理論上就可以實(shí)現(xiàn)多基因的共表達(dá)。但是作者提到其數(shù)據(jù)（未發(fā)表）顯示，轉(zhuǎn)基因的效率很低、而細(xì)胞篩選之后這些基因的表達(dá)水平也很低。所以最直接、最簡單的方案并不能成立。

****將這四個(gè)基因串聯(lián)在一個(gè)表達(dá)載體上。這樣類似限制性內(nèi)切酶酶切——連接酶連接的方案，實(shí)現(xiàn)基因組裝的實(shí)驗(yàn)，本科生都可以做。因?yàn)槔碚撋线@些個(gè)基因存在與同一個(gè)表達(dá)載體上，所以基因拷貝的數(shù)量是一致的、基因啟動(dòng)表達(dá)的時(shí)間是同步的，所以每個(gè)基因串聯(lián)之后，理論上這多個(gè)基因共表達(dá)時(shí)可以實(shí)現(xiàn)等水平的表達(dá)。但是實(shí)際總是不像理論上如此一帆風(fēng)順，實(shí)際情況是下游的基因表達(dá)水平總是比上游的基因表達(dá)水平要低很多。

****如此違背理論預(yù)測的結(jié)果實(shí)際上才是可以解釋的。這一切的故事發(fā)生在翻譯水平。當(dāng)所有基因“無縫”串聯(lián)連接時(shí)，核糖體一邊拖著越來越長的肽鏈，一邊繼續(xù)沿著mRNA翻譯。問題就在于其親和力可能不足以維持如此長片段轉(zhuǎn)錄本的翻譯，在翻譯到一半時(shí)（比如在黃色熒光蛋白處）就脫離轉(zhuǎn)錄本了。于是造成上游基因表達(dá)的機(jī)會(huì)更多，而下游基因表達(dá)的機(jī)會(huì)更少。從而下游基因表達(dá)量不如上游基因表達(dá)量。
****當(dāng)然，解決這個(gè)問題的辦法可以是每一個(gè)基因的上游單獨(dú)設(shè)置一個(gè)RBS。具體來說，基因工程里大量使用的方案是用IRES（病毒在宿主翻譯起始序列）。這樣每一個(gè)基因在招募核糖體時(shí)都是獨(dú)立的。這樣各個(gè)基因表達(dá)的機(jī)會(huì)不受彼此限制。不過新的問題是：他們各自表達(dá)機(jī)會(huì)不是相同的。獨(dú)立發(fā)生四次翻譯事件表達(dá)四種基因。這意味著這個(gè)方案并不是完美方案，每個(gè)基因表達(dá)量很有可能不是一致的，不能實(shí)現(xiàn)同水平表達(dá)。雖然四種蛋白表達(dá)可能都很高，但是四種的表達(dá)量卻不同。甚至都不可預(yù)測哪個(gè)表達(dá)多、哪個(gè)表達(dá)少。不可控的事情，顯然不是完美的。
****畢竟如果只是給豬上四種顏色，這項(xiàng)技術(shù)確實(shí)足夠了。這項(xiàng)技術(shù)真正的科學(xué)意義在于可以為癌細(xì)胞定位等提供方案。可以用四種顏色來標(biāo)記不同細(xì)胞，四種顏色能相同深度是理想的，方便標(biāo)記和比較。所以如果諸君有在做基因共表達(dá)的，不妨可以考慮這個(gè)策略。

為了克服這個(gè)問題，新的方案誕生了，就是基于2A短肽的方案。作者將多個(gè)基因用一種稱為2A的間隔序列串聯(lián)起來，是每個(gè)基因表達(dá)都高校表達(dá)。這段序列是19個(gè)氨基酸。簡單來說，它的功能就是剪切相鄰肽鏈。如此一來，核糖體翻譯完畢上游紅色熒光蛋白，就可以脫去紅色蛋白，跳到下游綠色蛋白的翻譯過程。一次翻譯事件的發(fā)生，可以實(shí)現(xiàn)了四個(gè)基因的等量共表達(dá)。

[1]上文地址http://www.plosone.org/article/i ... ournal.pone.0063241
[2]Mizuguchi H, Xu Z, Ishii-Watabe A, Uchida E, Hayakawa T (2000) IRES-dependent second gene expression is significantly lower than cap-dependent first
gene expression in a bicistronic vector. Mol Ther 1: 376–382.
[3]Zhou Y, Aran J, Gottesman MM, Pastan I (1998) Co-expression of human
adenosine deaminase and multidrug resistance using a bicistronic retroviral
vector. Hum Gene Ther 9: 287–293.

贊一下(10人)

回復(fù)此樓

48樓2013-07-06 20:58:04

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

凌波麗

專家顧問 (知名作家)

專家經(jīng)驗(yàn): +218
MolEPI: 44
應(yīng)助: 397 (碩士)
貴賓: 0.044
金幣: 2118.9
散金: 10
紅花: 208
帖子: 5633
在線: 571.6小時(shí)
蟲號(hào): 1766465
注冊(cè): 2012-04-19
性別: MM
專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
管轄: 生物科學(xué)綜合

目前一種常用的方法是利用熒光來偵測已經(jīng)接受DNA的細(xì)胞。通常將欲表達(dá)的基因克隆到含有綠色熒光蛋白的基因的載體上，接受此載體而且表達(dá)出綠色熒光蛋白的基因的細(xì)胞，在熒光顯微鏡下呈綠色。若欲表達(dá)的基因與綠色熒光蛋白的基因融合，而且由同一個(gè)啟動(dòng)子進(jìn)行轉(zhuǎn)錄，制造出的mRNA會(huì)含有兩個(gè)基因的序列，當(dāng)翻譯第一個(gè)基因而碰到終止密碼子時(shí)，核糖體會(huì)從mRNA上掉下來，造成第二個(gè)基因無法表達(dá)。解決這個(gè)問題的方法是，在兩個(gè)基因間加入一個(gè)內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(diǎn)(internal ribosome entry site,IRES)序列，讓第二個(gè)基因可由內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(diǎn)(internal ribosome entry site,IRES)序列處進(jìn)行翻譯，如此兩個(gè)基因就可以同時(shí)被翻譯，制造出不同的蛋白質(zhì)。

贊一下

回復(fù)此樓

49樓2013-07-06 22:47:27

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

xissy

銅蟲 (小有名氣)

應(yīng)助: 1 (幼兒園)
金幣: 108.9
散金: 16
紅花: 1
帖子: 179
在線: 62.7小時(shí)
蟲號(hào): 1221791
注冊(cè): 2011-03-05
性別: MM
專業(yè): 生物化學(xué)

引用回帖:

48樓: Originally posted by lanhaizhixin at 2013-07-06 20:58:04
同一個(gè)啟動(dòng)子的情況下，多個(gè)基因串聯(lián)起來，說是可以，不過越是下游的基因表達(dá)越是微弱。
這里是賴良學(xué)通訊的一篇文章，作者制作了一種帶有紅綠黃藍(lán)四種熒光的轉(zhuǎn)基因豬。

****直接將四種熒光基因表達(dá)載體同時(shí)轉(zhuǎn)入 ...

請(qǐng)問一下，您這里介紹的2A序列是針對(duì)真核的嗎？因?yàn)樽髡呤窃谪i里表達(dá)的。
在原核中有很多一個(gè)啟動(dòng)子串聯(lián)2個(gè)目的基因，每個(gè)目的基因前面都有RBS的情況。

贊一下

回復(fù)此樓

50樓2014-10-09 16:11:12

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn) 我要訂閱樓主清風(fēng)寨的主題更新

返回列表

最具人氣熱帖推薦 [查看全部]		作者	回/看	最后發(fā)表

[考研] 總分293求調(diào)劑 +7	加一一九 2026-03-25	10/500	2026-03-29 16:53 by 楊楊楊紫
[考研] 085601材料工程找調(diào)劑 +13	oatmealR 2026-03-29	14/700	2026-03-29 16:41 by 學(xué)員8dgXkO
[考研] 085600 286分材料求調(diào)劑 +8	麻辣魷魚 2026-03-27	9/450	2026-03-29 15:36 by Serene1974
[考研] 一志愿雙一流機(jī)械285分求調(diào)劑 +4	幸運(yùn)的三木 2026-03-29	5/250	2026-03-29 14:49 by Miko19
[考研] 一志愿211 初試270分求調(diào)劑 +8	谷雨上岸 2026-03-23	9/450	2026-03-29 01:00 by 我是小康
[碩博家園] 求調(diào)劑有機(jī)化學(xué)考研356分 +3	Nadiums 2026-03-25	4/200	2026-03-29 00:50 by 544594351
[考研] 學(xué)碩274求調(diào)劑 +9	Li李魚 2026-03-26	9/450	2026-03-28 21:42 by bymhappy
[考研] 085602 化工專碩 338分求調(diào)劑 +12	路癡小琪 2026-03-27	12/600	2026-03-28 15:41 by L135790
[考研] 求調(diào)劑 +3	QiMing7 2026-03-25	4/200	2026-03-28 14:30 by QiMing7
[材料工程] 一志愿C9材料與化工專業(yè)總分300求調(diào)劑 +8	曼111 2026-03-24	9/450	2026-03-28 07:58 by YYYYX1234
[考研] 340求調(diào)劑 +5	jhx777 2026-03-27	5/250	2026-03-28 04:18 by fmesaito
[考研] 266求調(diào)劑 +11	陽陽哇塞 2026-03-27	12/600	2026-03-27 17:56 by yu221
[考研] 298調(diào)劑 +3	jiyingjie123 2026-03-27	3/150	2026-03-27 11:57 by wxiongid
[考研] 一志愿鄭大085600，310分求調(diào)劑 +5	李瀟可 2026-03-26	5/250	2026-03-27 11:14 by 不吃魚的貓
[考研] 284求調(diào)劑 +11	junqihahaha 2026-03-26	12/600	2026-03-27 04:37 by wxiongid
[考研] 327求調(diào)劑 +7	prayer13 2026-03-23	7/350	2026-03-26 20:48 by 不吃魚的貓
[考研] 332求調(diào)劑 +6	032500 2026-03-25	6/300	2026-03-25 22:45 by 418490947
[考研] 0854AI CV方向招收調(diào)劑 +4	章小魚567 2026-03-23	4/200	2026-03-25 17:04 by CoderLoser
[考研] 296求調(diào)劑 +4	汪��？！ 2026-03-25	7/350	2026-03-25 16:41 by 汪��？！
[考研] 318求調(diào)劑 +3	plum李子 2026-03-23	3/150	2026-03-25 09:42 by 霧散后相遇lc