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老夏853鐵桿木蟲 (著名寫手)
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[求助]
請(qǐng)教使用gel red 染料的同學(xué)們，你們使用的瓊脂糖都是什么品牌什么型號(hào)的？
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求助�。�！ 實(shí)驗(yàn)室換了安全燃料 gelred，但是跑出的條帶不是彎曲的笑臉型就是 w型的。燃料美國(guó)總部建議使用純度更好的瓊脂糖，一時(shí)也不知道該用什么。 所以 在此發(fā)問，有沒有哪位同學(xué)同樣使用gelred 的，電泳條帶沒有問題的 你們使用的瓊脂糖的品牌、型號(hào)。能幫忙起身去看看貨號(hào)更好！謝謝各位了、 順便，如果有同學(xué)覺得問題不在瓊脂糖，也可以指出來(lái)。。。 120V 20 min，緩沖液 1x TAE， TAKARA 的loading buffer 6X ，瓊脂糖是西班牙進(jìn)口的 G10，與之前用EB 后染的條件一模一樣。 但是電泳條帶就是這個(gè)樣子的。。希望指點(diǎn)。 1118.jpg |
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【答案】應(yīng)助回帖
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小丹木木: 回帖置頂 2012-12-27 16:59:47
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小丹木木: 回帖置頂 2012-12-27 16:59:47
| 后染跑什么染料都沒關(guān)系,就看染料穩(wěn)定不穩(wěn)定,不穩(wěn)定的話就比加到樣里面消耗多很多,有點(diǎn)浪費(fèi).根據(jù)我用其他染料的經(jīng)驗(yàn),估計(jì)是加染料多了.loading buffer 不值錢,混入核酸染料的時(shí)候少加一些,比如是1/4,然后上樣的時(shí)候先試試每個(gè)上樣孔加不同量的混了核酸染料的loading buffer,會(huì)有一定范圍跑出來(lái)合適的帶的.從電泳圖看,marker有6條帶還歪,如果一般的樣只有marker其中一條帶那么多DNA的話，至少要比你現(xiàn)在用的要低6倍，推測(cè)低10倍可能就合適了。 |
7樓2012-12-25 00:39:28
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3樓2012-12-24 16:33:12
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我最近用SYBR@gold跑膠和樓主的一模一樣，之前還一直懷疑是不是我買的膠的問題，看到樓主的帖子才發(fā)現(xiàn)不是agrose的問題（咱們的兩個(gè)的agrose不同，染料也不同，但是之前做的時(shí)候都挺好的，我唯一不同的是之前用的是EB，現(xiàn)在換成了SYBR），于是我就像是不是染料的問題，果真如此：今天晚上又跑了一次，這次是后染，發(fā)現(xiàn)這種微笑或是波浪形的問題就沒有了，就是因?yàn)镾YBR是大分子，如果過和核酸結(jié)合后是會(huì)影響電泳的遷移率的，所以對(duì)于大分子的染料最好是后染，不過我下一步會(huì)試試稀釋足夠的倍數(shù)是不是可以再制備膠的時(shí)候加進(jìn)去。 |
38樓2015-01-19 20:49:35
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39樓2015-01-20 10:01:43
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4樓2012-12-24 20:50:17
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8樓2012-12-25 08:40:02
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9樓2012-12-25 08:41:43
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10樓2012-12-25 09:02:48
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