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老夏853

鐵桿木蟲 (著名寫手)

[求助] 請(qǐng)教使用gel red 染料的同學(xué)們,你們使用的瓊脂糖都是什么品牌什么型號(hào)的?

求助。!
實(shí)驗(yàn)室換了安全燃料 gelred,但是跑出的條帶不是彎曲的笑臉型就是 w型的。燃料美國(guó)總部建議使用純度更好的瓊脂糖,一時(shí)也不知道該用什么。
所以 在此發(fā)問,有沒有哪位同學(xué)同樣使用gelred 的,電泳條帶沒有問題的
你們使用的瓊脂糖的品牌、型號(hào)。能幫忙起身去看看貨號(hào)更好!謝謝各位了、

順便,如果有同學(xué)覺得問題不在瓊脂糖,也可以指出來(lái)。。。


120V 20 min,緩沖液 1x TAE,  TAKARA 的loading buffer 6X ,瓊脂糖是西班牙進(jìn)口的 G10,與之前用EB 后染的條件一模一樣。 但是電泳條帶就是這個(gè)樣子的。。希望指點(diǎn)。

1118.jpg
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547star

木蟲 (著名寫手)

【答案】應(yīng)助回帖

★ ★ ★
感謝參與,應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+3, 鼓勵(lì)應(yīng)助 2012-12-27 16:59:45
小丹木木: 回帖置頂 2012-12-27 16:59:47
后染跑什么染料都沒關(guān)系,就看染料穩(wěn)定不穩(wěn)定,不穩(wěn)定的話就比加到樣里面消耗多很多,有點(diǎn)浪費(fèi).根據(jù)我用其他染料的經(jīng)驗(yàn),估計(jì)是加染料多了.loading buffer 不值錢,混入核酸染料的時(shí)候少加一些,比如是1/4,然后上樣的時(shí)候先試試每個(gè)上樣孔加不同量的混了核酸染料的loading buffer,會(huì)有一定范圍跑出來(lái)合適的帶的.從電泳圖看,marker有6條帶還歪,如果一般的樣只有marker其中一條帶那么多DNA的話,至少要比你現(xiàn)在用的要低6倍,推測(cè)低10倍可能就合適了。
為什么
7樓2012-12-25 00:39:28
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zhlf1989513

金蟲 (小有名氣)

【答案】應(yīng)助回帖

感謝參與,應(yīng)助指數(shù) +1
我們用的是Biowest lot no是111860從來(lái)沒出現(xiàn)過你這種問題。。。
keepon
3樓2012-12-24 16:33:12
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happyjob

新蟲 (初入文壇)

這種提倡安全無(wú)毒的染料基本上都是大分子的,沒有膜透性,不會(huì)進(jìn)入到細(xì)胞膜中。但是大分子一般對(duì)電泳都有影響,凝膠孔隙是一定的,本來(lái)跑膠沒什么問題的,但是染料分子量一大,就會(huì)很容易造成過載現(xiàn)象。一般要不就是做后染,不過比較費(fèi)染料。要真做預(yù)制膠的話還是盡量減少染料的添加量。根據(jù)自己試驗(yàn)的要求來(lái)做,也別盡信產(chǎn)品說(shuō)明書,多稀釋點(diǎn),只要亮度夠,就沒有問題。
30樓2013-02-22 11:17:31
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Haibara_Ai

銅蟲 (小有名氣)

EMD OmniPur® Agarose
跑膠沒任何問題

31樓2013-02-22 23:28:05
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yuqianswim

銀蟲 (小有名氣)

我最近用SYBR@gold跑膠和樓主的一模一樣,之前還一直懷疑是不是我買的膠的問題,看到樓主的帖子才發(fā)現(xiàn)不是agrose的問題(咱們的兩個(gè)的agrose不同,染料也不同,但是之前做的時(shí)候都挺好的,我唯一不同的是之前用的是EB,現(xiàn)在換成了SYBR),于是我就像是不是染料的問題,果真如此:今天晚上又跑了一次,這次是后染,發(fā)現(xiàn)這種微笑或是波浪形的問題就沒有了,就是因?yàn)镾YBR是大分子,如果過和核酸結(jié)合后是會(huì)影響電泳的遷移率的,所以對(duì)于大分子的染料最好是后染,不過我下一步會(huì)試試稀釋足夠的倍數(shù)是不是可以再制備膠的時(shí)候加進(jìn)去。
38樓2015-01-19 20:49:35
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老夏853

鐵桿木蟲 (著名寫手)

引用回帖:
38樓: Originally posted by yuqianswim at 2015-01-19 20:49:35
我最近用SYBR@gold跑膠和樓主的一模一樣,之前還一直懷疑是不是我買的膠的問題,看到樓主的帖子才發(fā)現(xiàn)不是agrose的問題(咱們的兩個(gè)的agrose不同,染料也不同,但是之前做的時(shí)候都挺好的,我唯一不同的是之前用的是 ...

是的  
后來(lái)我也想明白了。染料能和DNA結(jié)合 必定帶相反電荷 在 電泳的時(shí)候也會(huì)向著反方向移動(dòng)。 安全的染料號(hào)稱是大分子 不能透過細(xì)胞膜 那么 帶的電荷大到一定程度就會(huì)影響核酸片段的遷移 造成條帶彎曲。。。。

市售的  gelred 有真有假。 真的是大分子  電泳條帶彎曲。 假的是EB 勾兌的  條帶沒問題。。。
39樓2015-01-20 10:01:43
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普通回帖

547star

木蟲 (著名寫手)

不是后染的吧?
為什么
2樓2012-12-24 16:10:37
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老夏853

鐵桿木蟲 (著名寫手)

引用回帖:
2樓: Originally posted by 547star at 2012-12-24 16:10:37
不是后染的吧?

之前是用EB 后染。 覺得麻煩又有危害 所以選擇這個(gè) 在做膠的時(shí)候加進(jìn)去。
4樓2012-12-24 20:50:17
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老夏853

鐵桿木蟲 (著名寫手)

引用回帖:
3樓: Originally posted by zhlf1989513 at 2012-12-24 16:33:12
我們用的是Biowest lot no是111860從來(lái)沒出現(xiàn)過你這種問題。。。

你們也用gelred染液? 在做膠的時(shí)候按照1:10000 加進(jìn)去嗎額?
5樓2012-12-24 20:50:48
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老夏853

鐵桿木蟲 (著名寫手)

引用回帖:
3樓: Originally posted by zhlf1989513 at 2012-12-24 16:33:12
我們用的是Biowest lot no是111860從來(lái)沒出現(xiàn)過你這種問題。。。

剛?cè)タ戳讼?我們的 瓊脂糖跟你的一樣。
6樓2012-12-24 20:54:36
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zhlf1989513

金蟲 (小有名氣)

【答案】應(yīng)助回帖

引用回帖:
6樓: Originally posted by 老夏853 at 2012-12-24 20:54:36
剛?cè)タ戳讼?我們的 瓊脂糖跟你的一樣。...

我們用的染料是Goldview。。。。
keepon
8樓2012-12-25 08:40:02
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zhlf1989513

金蟲 (小有名氣)

【答案】應(yīng)助回帖

引用回帖:
5樓: Originally posted by 老夏853 at 2012-12-24 20:50:48
你們也用gelred染液? 在做膠的時(shí)候按照1:10000 加進(jìn)去嗎額?...

我們的比例是1:20000.。。。4ml的膠液用2ul的Goldview
keepon
9樓2012-12-25 08:41:43
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10樓2012-12-25 09:02:48
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