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hlwnxfd2011銀蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
DNA測(cè)序
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| 請(qǐng)教一下各位前輩：是這樣的，前幾天送了兩個(gè)樣去測(cè)序公司，給的測(cè)序結(jié)果卻是載體序列，也就是我的目的基因沒(méi)有連到載體上，但我在做TA克隆時(shí)，用了藍(lán)白斑篩選，并做了PCR鑒定，都是陽(yáng)性，現(xiàn)在不知原因，請(qǐng)知道的前輩不吝賜教，感激不盡。 |
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cicelyzh
鐵桿木蟲(chóng) (職業(yè)作家)
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2樓2012-12-30 02:25:16
junior850621
鐵桿木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
hlwnxfd2011: 金幣+3, ★★★很有幫助 2012-12-31 15:10:45
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
hlwnxfd2011: 金幣+3, ★★★很有幫助 2012-12-31 15:10:45
| 個(gè)人認(rèn)為藍(lán)白斑可以不做，基本上不能反映任何情況�？梢赃x擇酶切系統(tǒng)驗(yàn)證一下，最好是序列上有一個(gè)切點(diǎn)，載體片段上有另一個(gè)位點(diǎn)。pcr鑒定的話我一般都不會(huì)選擇先前做pcr克隆序列時(shí)的引物，而是在序列中段設(shè)計(jì)一條新引物，這樣還能得到理論上大小的片段的話，應(yīng)該基本可以說(shuō)是陽(yáng)性。因?yàn)槿绻�使用原來(lái)的引物做，不管你得到的是不是目的片段都還是能檢測(cè)到與原來(lái)p到條帶一樣大小的一個(gè)條帶。 |
3樓2012-12-30 14:19:37
zhaodahe
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4樓2012-12-30 15:54:50
hlwnxfd2011
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5樓2012-12-31 15:11:43
hlwnxfd2011
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6樓2012-12-31 15:12:01
hlwnxfd2011
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7樓2012-12-31 15:12:21
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8樓2012-12-31 16:35:43
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