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日?qǐng)?com新蟲 (初入文壇)
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[求助]
考馬斯亮藍(lán)扣除空白 已有1人參與
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各位大神，你們用考馬斯亮藍(lán)測(cè)吸光度是測(cè)一個(gè)范圍（400-650nm）,還是就測(cè)595nm一個(gè)點(diǎn)啊。 我的空白是：1ml去離子水+5ml考馬斯亮藍(lán) 考馬斯亮藍(lán)配制：100mg考馬斯亮藍(lán)+50ml無水乙醇+100ml85%磷酸，定容至100ml，過濾備用 問題：為了保險(xiǎn)起見，我都是測(cè)一個(gè)范圍的（400-650nm）但在扣除空白時(shí)，扣除后，比色皿不拿出來，繼續(xù)測(cè)，550-650處吸光度會(huì)上漂，每2min測(cè)一下，隨時(shí)間推移，漂移更厲害，說明參比都是不穩(wěn)定的，求有經(jīng)驗(yàn)大神指導(dǎo)下是什么原因 并且測(cè)標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)，最大吸收在585nm附近，不是595nm |
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httarea
木蟲 (小有名氣)
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【答案】應(yīng)助回帖
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silicare: 金幣+5, BioEPI+1, 應(yīng)助指數(shù)+1 2013-12-24 18:10:38
silicare: 金幣+5, BioEPI+1, 應(yīng)助指數(shù)+1 2013-12-24 18:10:38
| 我也出現(xiàn)了這個(gè)問題，參比是不穩(wěn)定，但一分鐘變化幅度很小，也就0.001，所以可以忽略。主要還是蛋白質(zhì)跟考馬斯亮藍(lán)反應(yīng)時(shí)間不同會(huì)出現(xiàn)不同效果。你可以固定一個(gè)時(shí)間點(diǎn)測(cè)，比如都定反應(yīng)10min后開始測(cè)。而且測(cè)兩個(gè)樣的話最好之間洗一下比色皿 |
3樓2013-12-24 10:48:33
日?qǐng)?com
新蟲 (初入文壇)
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2樓2013-01-05 12:40:20
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