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崔永霞鐵蟲 (小有名氣)
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[求助]
RACE技術(shù)都需要對(duì)總RNA進(jìn)行脫磷酸和脫帽處理嗎
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| 各位前輩，想請(qǐng)教一下，RACE技術(shù)都需要進(jìn)行脫磷酸和脫帽處理嗎？我看一些文獻(xiàn)上寫的是5'RACE做脫磷酸和脫帽處理，3'沒做這個(gè)處理，這到底是怎么回事啊？ |
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崔永霞: 金幣+5, ★★★很有幫助, 謝謝 2013-01-04 10:05:29
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你因該是沒搞清楚mRNA結(jié)構(gòu)和RACE 原理： mRNA: 5‘ A B 3’（編輯不出線條，你就湊活著看吧。） 1.mRNA合成后會(huì)在5‘加帽,磷酸化 3’加ploA 2.圖中AB兩點(diǎn)為mRNA斷裂產(chǎn)生的（你得想明白這點(diǎn)，就都明白了。） 3. 3'是利用mRNA3’端的ploA和A點(diǎn)（圖中標(biāo)注）為引物結(jié)合為點(diǎn)擴(kuò)出兩點(diǎn)間的片段;A為用已知序。 4.利用3‘測(cè)序結(jié)果設(shè)計(jì)B點(diǎn)引物。 5. 5‘RACE是先在5’端加一個(gè)接頭然后利用接頭和B點(diǎn)為引物結(jié)合位點(diǎn)擴(kuò)兩點(diǎn)間片段。因?yàn)?‘加了帽和磷酸化 所以在加接頭之前需要去帽和磷酸化。而做3’是不關(guān)乎帽和磷酸化，就不用去了�。�！ |
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崔永霞2樓2013-01-02 12:12:03
崔永霞
鐵蟲 (小有名氣)
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3樓2013-01-04 10:08:04
4樓2013-01-05 09:07:39
5樓2013-01-05 09:17:43
崔永霞
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6樓2013-01-05 12:29:48
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