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WAX2010銀蟲 (小有名氣)
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[交流]
我可能發(fā)現(xiàn)了一種新奇的生物發(fā)光現(xiàn)象 已有19人參與
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實(shí)驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)了一個(gè)新奇的發(fā)光現(xiàn)象，想研究一下卻不知從何入手，希望各位前輩為我指點(diǎn)迷津。 我是細(xì)胞生物學(xué)專業(yè)的一名學(xué)生，平日主要從事細(xì)菌展示技術(shù)的研究，所用的細(xì)菌是大腸桿菌MC1061，內(nèi)部有一個(gè)可誘導(dǎo)表達(dá)GFP和CM抗性的表達(dá)載體。實(shí)驗(yàn)過程中需要對(duì)細(xì)菌離心和清洗，我一般采用3000g，5min離心，離心后會(huì)把上清的LB倒到一個(gè)小廢液缸里，清洗用的PBS也會(huì)倒入這個(gè)廢液缸，偶爾少量的菌液也會(huì)倒入此廢液缸，由于實(shí)驗(yàn)比較忙，廢液缸里的廢液并非天天處理，有時(shí)候我看到里面渾濁或者表面漂了一層微生物，我都會(huì)加入新吉爾滅或者75%的酒精滅菌。前段時(shí)間有一次，我加入酒精后搖了搖，發(fā)現(xiàn)本來微黃的液體變成了藍(lán)綠色，我感覺很新奇但也沒太在意，就把廢液處理掉了，并把廢液缸用清水涮了涮。接下來一次廢液中加了一點(diǎn)75%酒精后又出現(xiàn)了一樣的現(xiàn)象。一開始我想是不是里面污染了其他的細(xì)菌或真菌，便把廢液吸出來，3000g，5min離心，可見有白色的細(xì)菌離下來，但上清依然是藍(lán)色的，我把藍(lán)色的上清放到紫外燈下，可以看到有很亮的藍(lán)白色熒光，而離心下來的細(xì)菌，PBS重懸后卻看不到熒光，即使將我們誘導(dǎo)GFP表達(dá)的菌PBS重懸后在紫外燈下也是看不到熒光的。我想上清有蛋白？我又把上清10000g，5min離心，并沒有看到有任何東西離心下來。因此上清中是不是產(chǎn)生了一種新的發(fā)光物質(zhì)。我對(duì)這個(gè)現(xiàn)象很感興趣，因此把廢液收集了起來。放置了一夜后藍(lán)綠色又變成了淺黃色，振蕩搖動(dòng)液體，液體慢慢從淺黃色變成淺藍(lán)色又變成藍(lán)綠色（以上現(xiàn)象可能說明變成藍(lán)色液體與酒精無關(guān)），而且隨著放置時(shí)間的延長，里面長起來的菌越來越多，搖動(dòng)液體使其由黃色變成藍(lán)綠色花的時(shí)間也越來越長，這是不是說明里面某種物質(zhì)在有氧存在的情況下可以發(fā)出藍(lán)光？但是我離心收集的上清放在EP管中一直是淺藍(lán)色的呀，顏色的變化也不一定依賴氧的存在，還是二氧化碳的存在抑制了藍(lán)綠色的顯現(xiàn)。上網(wǎng)查到有發(fā)光細(xì)菌，我看到的現(xiàn)象與發(fā)光細(xì)菌不同，發(fā)光細(xì)菌是在黑暗中看到光，而我觀察到的是在可見光下有藍(lán)綠色，紫外激發(fā)下也可產(chǎn)生熒光。 我也試圖從這個(gè)廢液中挑出感興趣的菌，我先取出少量廢液，加入到含有CM的LB中，發(fā)現(xiàn)菌長的很慢，而且長起來后，怎么搖動(dòng)也沒有看到變色的現(xiàn)象，放在紫外燈下也沒看到有很強(qiáng)的熒光。 我又取了一點(diǎn)廢液到無CM的LB中，菌長的還可以，就是也沒看到變色現(xiàn)象？ 下一步該怎么辦呢？？ 希望大家多多指點(diǎn)，謝謝 [ Last edited by WAX2010 on 2013-1-3 at 14:30 ] 謝謝大家的建議，由于老板反對(duì)進(jìn)行嘗試研究，菌種已被處理了…… [ Last edited by WAX2010 on 2013-10-8 at 14:42 ] |
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 化學(xué)污染與環(huán)境健康 | 考研經(jīng)驗(yàn) | 只是感興趣 | 細(xì)菌表面展示 |
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小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
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| 我覺得你觀察到的現(xiàn)象非常有趣，很有可能是某種會(huì)分泌到培養(yǎng)液中的物質(zhì)（可能是蛋白質(zhì)，或者化學(xué)物質(zhì)），而非微生物；3000g是可以離心下大部分細(xì)菌的，而10000g并不能離去蛋白質(zhì)；既然能觀察到較強(qiáng)的光，說明這種物質(zhì)含量較高，可嘗試對(duì)其進(jìn)行分離、鑒定。我覺得有幾個(gè)細(xì)節(jié)需要你注意：1、你在可見光下觀察到的顏色變化和紫外激發(fā)下的熒光是否為一種東西（光還是顏色變化？是否是同一波長的發(fā)射光？），2、發(fā)光現(xiàn)象是否不依賴酒精和氧氣（乙醇和氧氣分別做電子供體和受體？）。還有一點(diǎn)兒，發(fā)光細(xì)菌的發(fā)光并不一定在黑暗中，卻依賴于一些還原性物質(zhì)。 |
WAX20104樓2013-01-03 21:29:10
cicelyzh
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amisking: 金幣+3, 鼓勵(lì)積極發(fā)帖幫助解答問題。 2013-01-03 20:01:42
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amisking: 金幣+3, 鼓勵(lì)積極發(fā)帖幫助解答問題。 2013-01-03 20:01:42
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現(xiàn)象非常有意思。你確定發(fā)光的是菌本身嗎？從你的描述感覺是photoreceptor。很多生物都有的，只是含量有限。我感覺還是和你倒在里面的工程菌和其上清直接相關(guān)的。我不知道為什么你的菌在紫外下沒有熒光。我做的熒光基因載體宿主可以在紫外下檢測(cè)到的。有些熒光的顏色特殊，還能直接用肉眼看到。 因?yàn)槟愕陌l(fā)光物質(zhì)已經(jīng)在上清里面了，我覺得你可以試試純化發(fā)光物質(zhì)，對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行鑒定，分析是什么東西，然后再分析大量產(chǎn)生它的原因。 |
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