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向日葵的足跡銅蟲 (初入文壇)
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[求助]
酵母菌液RNA提取
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| 各位大俠，有誰做過酵母菌液RNA 提取的？求助一下是根據(jù)什么方法提的？謝謝。 |
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向日葵的足跡
銅蟲 (初入文壇)
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3樓2013-01-05 14:54:50
xingxingsf
金蟲 (初入文壇)
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2樓2013-01-04 21:17:01
yaolinlshang
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- 專業(yè): 色譜分析
【答案】應(yīng)助回帖
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是菌體RNA吧，我這里有方法。你看一下。 預(yù)處理： 槍頭、離心管等塑料制品在DEPC水中處理過夜。研缽、鑷子、藥勺等用錫箔紙包好180攝氏度烘8小時。如若著急，也可以將這些東西用酒精燒灼，滿滿的一研缽酒精點燃即可，據(jù)說此種方法更好。實驗臺面用酒精噴灑，操作時要求手套和口罩全副武裝。 實驗步驟：以TRIZOL法為基準(zhǔn)。 1.液氮預(yù)冷研缽、研棒和藥勺。 2.將樣品倒入到液氮中，充分研磨。將粉末轉(zhuǎn)移至已用DEPC處理過的離心管中。 3.加入1mlTRIZOL，吸打混勻后，冰上放置30min。 4.加入0.2ml氯仿后，冰上放置20min. 5.4攝氏度，13500rpm（如果有條件，可以設(shè)置到14000rpm甚至更高)離心15min。 6.將上層的水系轉(zhuǎn)移到新的離心管中，加入0.5ml異丙醇（已經(jīng)冰浴）混勻后，零下20攝氏度放置1h。 7.4攝氏度，13500rpm離心10min，離心后，可以看到膠狀沉淀。 8.棄上清，用DEPC水配制的75%乙醇1ml洗滌，吸打混勻后，零下20攝氏度放置2h。 9.4攝氏度，13500rpm離心10min。 10.盡可能去除上清后，室溫放置5-10min，吹干RNA。但是不可吹的過干，也不要過濕，否則RNA電泳效果很差。 11.向RNA中加入30ulDEPC水，其中20ul凍存于-80度冰箱中，另外10ul用于瓊脂糖凝膠檢測。 我現(xiàn)在做的就是酵母的RNA提取，如果有什么問題可以用Q聊。309075230，煙花錯。 2.用 |
4樓2013-01-08 09:49:35
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