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北京石油化工學院2026年研究生招生接收調(diào)劑公告

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dongrh1981

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【答案】應助回帖

感謝參與，應助指數(shù) +1

引用回帖:

7樓: Originally posted by jasminezhao at 2013-01-05 09:23:00
我是用試劑盒提的，以前體的質(zhì)粒濃度都是四五百，但是這兩回都是幾十，而且以前測序得到的結(jié)果是一千四五百個bp，但是這兩回都是三四百個，所以我也不知道哪個是正確的了。求解答，謝謝��！...

測序返回的結(jié)果可能有1.4～1.5kb，但是能夠清楚辨識并且有效和正確的序列一般只有700nt～800nt左右，一個測序反應一般有效讀長只有700nt左右，這是業(yè)內(nèi)公認的，也是目前應用sanger測序法儀器的性能極限。

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呼吸的痛

11樓2013-01-06 11:29:52

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xingxingsf

金蟲 (初入文壇)

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【答案】應助回帖

引用回帖:

9樓: Originally posted by jasminezhao at 2013-01-05 10:03:46
恩，知道了謝謝。還有就是拿到序列結(jié)果后怎么進行分析啊，我不太會分析事與原序列比對嗎？...

拿到序列結(jié)果后只要和原序列進行Blast就可以了。完全一致就能進行下面的實驗了。Blast的方法很容易，百度有很多介紹，你可以自學一下�；蛘邌枎熜謳熃�，更快些。

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12樓2013-01-06 13:38:20

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jasminezhao

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引用回帖:

12樓: Originally posted by xingxingsf at 2013-01-06 13:38:20
拿到序列結(jié)果后只要和原序列進行Blast就可以了。完全一致就能進行下面的實驗了。Blast的方法很容易，百度有很多介紹，你可以自學一下�；蛘邌枎熜謳熃�，更快些。...

恩恩，我百度一下看看，謝謝你��！

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13樓2013-01-07 08:55:05

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jasminezhao

金蟲 (小有名氣)

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引用回帖:

11樓: Originally posted by dongrh1981 at 2013-01-06 11:29:52
測序返回的結(jié)果可能有1.4～1.5kb，但是能夠清楚辨識并且有效和正確的序列一般只有700nt～800nt左右，一個測序反應一般有效讀長只有700nt左右，這是業(yè)內(nèi)公認的，也是目前應用sanger測序法儀器的性能極限。...

恩，但是我想知道的是為什么相同的治理測的結(jié)果相差這么大，就是之前得到了一千四五百bp么后來去測就得到三四百bo,想請教一下是什么原因，謝謝��！

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14樓2013-01-07 08:57:06

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jasminezhao

金蟲 (小有名氣)

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引用回帖:

10樓: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-05 12:44:38
是什么載體？不同載體的復制子不一樣，拷貝數(shù)也不同。此外，是不是抗生素失效了。如果抗生素壓力小，質(zhì)粒的拷貝數(shù)也上不去。還有，你的平板在4度放了很久嗎？時間久了菌的活力下降，提質(zhì)粒的時候濃度也上不去。至于 ...

用的是大腸桿菌，抗生素的濃度是200mg/ml，應該不能失效，平板方的時間也不是很長。還有就是你們一般測序是給公司提供的引物是用自己的還是用公司通用的？一般用一個還是兩個？謝謝

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15樓2013-01-07 09:00:36

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dongrh1981

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【答案】應助回帖

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14樓: Originally posted by jasminezhao at 2013-01-07 08:57:06
恩，但是我想知道的是為什么相同的治理測的結(jié)果相差這么大，就是之前得到了一千四五百bp么后來去測就得到三四百bo,想請教一下是什么原因，謝謝��！...

這個和測序?qū)嶒灢僮魅藛T及送測序樣品的濃度及純度有關。
測序樣品濃度、純度較低時測序信號較低，測到一定長度（300、400、500均有可能）信號衰減到無法檢測，就會得到較短的測序結(jié)果。
測序?qū)嶒灢僮魅藛T在體系配制和測序相關的條件沒有優(yōu)化至最佳時，會導致測序反應信號出現(xiàn)突然性衰減（如測序引物濃度偏低時，測序反應在進行大20個循環(huán)時引物耗盡，就會出現(xiàn)熒光信號的衰減或無信號等現(xiàn)象），從而導致得到較短的測序結(jié)果。

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16樓2013-01-07 09:13:06

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jasminezhao

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16樓: Originally posted by dongrh1981 at 2013-01-07 09:13:06
這個和測序?qū)嶒灢僮魅藛T及送測序樣品的濃度及純度有關。
測序樣品濃度、純度較低時測序信號較低，測到一定長度（300、400、500均有可能）信號衰減到無法檢測，就會得到較短的測序結(jié)果。
測序?qū)嶒灢僮魅藛T在體系配 ...

哦，明白了謝謝。那測序的結(jié)果短不代表不可信是不是？

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17樓2013-01-07 09:16:39

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dongrh1981

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18樓2013-01-07 10:29:00

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cicelyzh

鐵桿木蟲 (職業(yè)作家)

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【答案】應助回帖

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15樓: Originally posted by jasminezhao at 2013-01-07 09:00:36
用的是大腸桿菌，抗生素的濃度是200mg/ml，應該不能失效，平板方的時間也不是很長。還有就是你們一般測序是給公司提供的引物是用自己的還是用公司通用的？一般用一個還是兩個？謝謝...

如果公司提供的通用引物可以用的話就直接用他們的，如果沒有合適的就用自己的。提供引物的數(shù)量根據(jù)要測序的片段大小來。如果序列小于600bp，一個引物就可以了。如果超過1.4kb，除了兩頭的引物，中間還要自己設計一個引物才能測通。

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19樓2013-01-07 11:18:01

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jasminezhao

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18樓: Originally posted by dongrh1981 at 2013-01-07 10:29:00
是，測序結(jié)果好不好主要看峰譜圖，好的峰譜圖出的峰干凈利落，沒有重疊，信號強度適中，本底較低。如果出現(xiàn)套峰、信號噪音高，峰與峰之間界限模糊，有的甚至兩個峰融合到一起，那樣的圖就會比較可疑，這時就要和測 ...

嗯嗯，知道了，謝謝��！

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20樓2013-01-07 20:53:50

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