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[交流]
提取一種微型動(dòng)物DNA，怎么也提不出來(lái)，幫忙出出主意
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大家可能都知道能寄生在人臉上的螨蟲(chóng)（蠕形螨科）， 我現(xiàn)在的實(shí)驗(yàn)對(duì)象就是螨蟲(chóng)，不過(guò)和寄生在人身上的螨不屬于同一科，其成蟲(chóng)體壁很厚，包含蠟質(zhì)層 幾丁質(zhì) ＝＝，體長(zhǎng)僅有０.４mm左右，十分小， 關(guān)鍵是組織破碎，釋放DNA，但因?yàn)轶w形太小，一直找不到合適的方法， 各位蟲(chóng)俠給點(diǎn)意見(jiàn) 謝了先 |
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glucidum
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3樓2007-07-31 09:48:13
xiaopu_yin
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2樓2007-07-31 06:40:31
4樓2007-07-31 10:25:01
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估計(jì)一些常規(guī)的方法你都試過(guò)，有沒(méi)有想過(guò)在溶液中加幾丁質(zhì)酶，消化一部分蟲(chóng)體壁？ --------------------------------------------------------- 回復(fù)2樓;想過(guò)了，一直想買,買不到,好象這種酶不常用, ---------------------------------------------------------- 如果LZ只是需要提取一點(diǎn)點(diǎn)DNA 來(lái)做PCR,進(jìn)行系統(tǒng)分析的話.建議試試在解剖鏡下直接用鑷子碾碎蟲(chóng)體然后加入蛋白酶消化處理。消化處理的溶液即可直接用做PCR,不需要再做沉淀處理等等。 具體方法LZ可以參考果蠅系統(tǒng)分析研究中DNA處理方法,只是要多一步機(jī)械破碎吧 -------------------------------------------------------- 回復(fù)3樓::我都用昆蟲(chóng)針刺破了,但在轉(zhuǎn)移到離心管中可能損失很多,所以沒(méi)有保證,偶爾能提出來(lái),而且太費(fèi)時(shí)了 --------------------------------------------------------- 超聲破碎或高速球磨等機(jī)械方法肯定能夠破碎，用研磨也可以，剩下的就聽(tīng)3樓的吧，開(kāi)始我也沒(méi)有想到PCR擴(kuò)增，總是不做這方面的事，生疏了。 ---------------------------------------------------------- 回復(fù)4樓:超聲破碎或高速球磨等機(jī)械 實(shí)驗(yàn)條件差,沒(méi)這些儀器...... ----------------------------------------------------------- 最后感謝三位蟲(chóng)友的回復(fù) |
5樓2007-07-31 20:33:07
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