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will-jiang金蟲 (初入文壇)
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[求助]
鎳磁珠洗脫蛋白的問(wèn)題
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| 今天使用鎳磁珠提取蛋白，后來(lái)跑膠發(fā)現(xiàn)目的蛋白是提出來(lái)了，可是洗脫液中的蛋白含量很少，說(shuō)明蛋白還綁在鎳磁珠上沒有被洗脫下來(lái)，請(qǐng)問(wèn)下這是什么原因呢？是洗脫液和洗滌液的問(wèn)題么？ |
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cicelyzh
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【答案】應(yīng)助回帖
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wizardfan: 金幣+2, 謝謝分享經(jīng)驗(yàn) 2013-01-06 05:56:19
will-jiang: 金幣+8, ★★★★★最佳答案 2013-01-06 22:03:39
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will-jiang: 金幣+8, ★★★★★最佳答案 2013-01-06 22:03:39
| 如果elute液中的目的蛋白少，你先要確定目的蛋白是還結(jié)合在磁珠上，還是在wash磁珠的時(shí)候就損失掉了。你應(yīng)該有預(yù)留組分吧，可以做western檢測(cè)一下。如果是前者，可以再次elute磁珠或者增加elute buffer中咪唑濃度；如果是后者，需要降低wash buffer中咪唑濃度。 |
2樓2013-01-06 02:31:45
3樓2013-01-06 12:19:56
will-jiang
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4樓2013-01-06 22:03:26
will-jiang
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5樓2013-01-06 22:04:00
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6樓2013-01-07 17:20:52
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