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細(xì)細(xì)的風(fēng)新蟲 (初入文壇)
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[求助]
根莖類中藥DNA提取
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各位大神，對于根莖類中藥材DNA提取可有好的建議！！求助啊^……小弟現(xiàn)在金幣不多！ |
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細(xì)細(xì)的風(fēng)
新蟲 (初入文壇)
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2樓2013-01-06 09:43:59
tigertang
木蟲 (著名寫手)
- MolEPI: 1
- 應(yīng)助: 16 (小學(xué)生)
- 金幣: 1771.2
- 紅花: 5
- 帖子: 1046
- 在線: 260.7小時(shí)
- 蟲號: 64225
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- 性別: GG
- 專業(yè): 細(xì)胞增殖、生長與分化
【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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1.根莖中估計(jì)多糖含量比較多，建議用CTAB法； 2.盡量增加除糖步驟 以下出自：http://www.genesail.com/newDetail.aspx?id=81&typeid=31 如何消除多糖的影響？ A3：一般來說，SDS法提取的DNA會(huì)還有較多的多糖，使DNA成膠凍狀。而CTAB DNA提取純化法可基本上除去多糖。如果是植物材料本身含糖量比較高，可嘗試以下方法： 1、在DNA未溶出之前，先用一些緩沖液洗去多糖�？捎镁彌_液如：100 mmol/L Tris –HCl (pH=8.0)、5 mmol/L EDTA和0.35 mol/L Sorbitol。 2、使DNA提取液中的多糖先沉淀。在提取液中加入0.35倍體積的無水乙醇，迅速混勻，多糖會(huì)先沉淀。 3、沉淀DNA時(shí)，使多糖保留在溶液中。如用乙醇沉淀時(shí)，在待沉淀溶液中加入1/2體積的5 mol/L NaCl，或加NH4Ac使終濃度為 10 mmol/L；或0.5 ml DNA液中加5 ml 4 mol/L NaCl 和 0.625 mL 13% PEG 8000（冰浴 1 h）。 4、多糖和DNA的共沉淀物進(jìn)行再分離。如用TE緩沖液反復(fù)清洗共沉淀物，將清洗液合并再用醇沉淀DNA，或?qū)⒊恋砦锶芙夂�，�?jīng)瓊脂糖電泳，切下DNA部 分再將膠回收，或者用多糖水解酶將多糖降解。 |
3樓2013-01-06 11:21:32
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