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haihaome

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[求助] 急求革蘭氏陽(yáng)性菌做蛋白質(zhì)總量測(cè)定時(shí)前處理腫么弄��？？？？

革蘭氏陽(yáng)性菌做蛋白質(zhì)總量測(cè)定時(shí)前處理腫么弄��？？？？有些人說(shuō)用溶菌酶溶了之后用超生破碎，但是溶菌酶的加入會(huì)不會(huì)對(duì)總體蛋白總量測(cè)定有影響啊，還有人說(shuō)用裂解液處理，裂解液對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌也有效嗎？菇?jīng)龅木茄挎邨U菌，細(xì)胞壁較厚該腫么辦？求高手指點(diǎn)啊。。。。。。。。急求。。。。

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1樓 2013-01-06 17:03:55

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hqsinberg

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haihaome: 金幣+10 2013-01-06 20:11:44

我以前是超聲波破碎測(cè)定蛋白質(zhì)濃度。你可以用溶菌酶，加入前測(cè)定其質(zhì)量不就可以了（每毫克酶含有多少蛋白質(zhì)）

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2樓2013-01-06 19:50:09

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haihaome

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引用回帖:

2樓: Originally posted by hqsinberg at 2013-01-06 19:50:09
我以前是超聲波破碎測(cè)定蛋白質(zhì)濃度。你可以用溶菌酶，加入前測(cè)定其質(zhì)量不就可以了（每毫克酶含有多少蛋白質(zhì)）

請(qǐng)問(wèn)溶菌酶用的濃度需要多大，另外超聲需要的具體條件是多少

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3樓2013-01-06 20:11:31

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hqsinberg

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引用回帖:

3樓: Originally posted by haihaome at 2013-01-06 20:11:31
請(qǐng)問(wèn)溶菌酶用的濃度需要多大，另外超聲需要的具體條件是多少...

這個(gè)真不知道了。你搜索一下你這株菌株的相關(guān)報(bào)道或類(lèi)似菌株的報(bào)道，然后自己大概優(yōu)化一下功率和時(shí)間，破碎方式就可以了
相同細(xì)胞以西跑破碎后，蛋白最多為保準(zhǔn)

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4樓2013-01-06 21:06:46

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我提過(guò)芽孢桿菌的蛋白，是用溶菌酶加超聲破碎（我用的是1000w,30min, 超聲1min,停1min,真?zhèn)€過(guò)程在冰上進(jìn)行）因?yàn)槲业膶?shí)驗(yàn)不需要測(cè)濃度，但是提完后感覺(jué)還挺好的，要是怕濃度低的話(huà)可以用濃縮試劑盒濃縮下蛋白

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5樓2013-01-07 10:58:04

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lidanye

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我們也有做類(lèi)似的菌，用的是超聲破碎(振幅40%，5s on 5s off, 超聲總時(shí)間5min)或者french press
不過(guò)目的是測(cè)酶活
一般能拿到差不多10 mg/mL總蛋白

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6樓2013-01-07 13:01:37

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mizhoulong

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沒(méi)做過(guò)，做的多得是提取DNA，先用破壁酶，再用溶菌酶。

不知道《分子克隆》這本書(shū)上有沒(méi)有操作規(guī)程，小木蟲(chóng)有這套資料

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環(huán)境衛(wèi)生、微生物學(xué)、衛(wèi)生應(yīng)急

7樓2013-01-08 05:38:36

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