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測(cè)定總氮
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| 請(qǐng)問各位是怎么測(cè)定發(fā)酵液中的總氮的？用的濾液還是發(fā)酵液？如果用濾液測(cè)定總氮的話，只能測(cè)定出溶液的氮（包括無(wú)機(jī)氮和有機(jī)氮）；若以測(cè)定發(fā)酵液，用凱氏定氮方法測(cè)定的話，則會(huì)測(cè)定出菌體中的氮，結(jié)果也不準(zhǔn)確（經(jīng)過測(cè)定，在整個(gè)發(fā)酵過程中以這種方法測(cè)定，總氮量幾乎不變）。請(qǐng)問要想測(cè)出菌體對(duì)于總氮的利用情況要怎么測(cè)定？ |
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wwdxx2004: 金幣+1 2013-01-14 08:27:33
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α-氨基氮測(cè)定試劑的配制及測(cè)定方法 一、測(cè)定試劑的制備 A、測(cè)定試劑A的配制，擬定配制1000ml。 將0.671gOPA（鄰苯二甲醛）溶解于100ml95%的乙醇。 將3.837gNaOH，8.468g硼酸，0.816gNAC（N-乙酰半胱氨酸）用800ml去離子水溶解，并將含OPA的100ml乙醇溶液與之混合后定容到1000ml。 B、測(cè)定試劑B的配制，擬定配制1000ml。 將3.837gNaOH，8.468g硼酸，0.816gNAC（N-乙酰半胱氨酸）用800ml去離子水溶解后與100ml95%的乙醇混合，并用去離子水定容到1000ml。 以上溶液可以放在4攝氏度下存放兩周。樣品液中氨基N的濃度應(yīng)該稀釋到250mg/L的范圍內(nèi)，以確保測(cè)得數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。 二、樣品液的制備 1．空白樣，將50ul水加入潔凈的15ml離心管中，加入3ml的A液用作為零點(diǎn)。 2．樣品，將50ul樣品液加入潔凈的離心管，加入3mlA液混勻，10分鐘后測(cè)其在335nm下的吸光值。 3．樣品空白，取50ul的樣品液加入潔凈的離心管，加入3mlB液混勻10分鐘后測(cè)量其335nm下的吸光值。 三、標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作 配制10mM的異亮氨酸的標(biāo)準(zhǔn)溶液（0.328g異亮氨酸用去離子水溶解并定容到250ml）。 基本氨基酸態(tài)氮的標(biāo)準(zhǔn)曲線和計(jì)算 Tube blank 1 2 3 4 5 10 mM ile (µL) 0 10 20 30 40 50 去離子水 (µL) 50 40 30 20 10 0 OPA reagent (µL) 3000 3000 3000 3000 3000 3000 Absorbance 335nm Nitrogen (mg/L) 0 28 56 84 112 140 A（凈）=A（樣品）-A（樣品空白） 四、計(jì)算 樣品中氨基N的濃度： Nitrogen (mg/L)= (Absorbance * Slope + Intercept) * Dilution Factor 這是我們實(shí)驗(yàn)室發(fā)酵過程中測(cè)氮的方法，僅供參考 |
2樓2013-01-12 16:08:32
3樓2013-01-12 16:16:17
wgy2007
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