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[求助]
PCR內(nèi)參
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| 現(xiàn)在我正在跟師姐學(xué)習(xí)PCR，做了一兩次 師姐說內(nèi)參沒出來 你先別跑了 逆轉(zhuǎn)錄酶挺貴的 郁悶 所以求教蟲友下 誰來解釋下內(nèi)參唄 |
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宇翔戀歌: 金幣+2, ★★★很有幫助, 謝謝哈 2013-01-15 15:34:24
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內(nèi)參其實(shí)就是管家基因，是指在所有細(xì)胞中均要表達(dá)的一類基因，在PCR相對(duì)定量中的作用相當(dāng)于物理學(xué)上的參照物，目的基因表達(dá)的變化以參照物為標(biāo)準(zhǔn)計(jì)算其相對(duì)變化，因此在相對(duì)定量PCR實(shí)驗(yàn)中，內(nèi)參基因的擴(kuò)增必須是穩(wěn)定的特異的，可見你師姐是高手。 繼續(xù)努力！ |
2樓2013-01-15 13:41:29
liugn
銀蟲 (初入文壇)
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【答案】應(yīng)助回帖
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宇翔戀歌: 金幣+5, ★★★很有幫助, 好的 以后多交流 2013-01-17 09:27:17
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| 同意樓上。內(nèi)參就是指管家基因，我一般都是使用GAPDH 作為我的PCR內(nèi)參，但是內(nèi)參的引物跟你的PCR 引物不同，別加錯(cuò)了，另外，除了設(shè)置內(nèi)參，我還做control 組，以保證sample 的condition 正確，所以我的上樣順序?yàn)椋翰患覦NA組（negative control）， 已知DNA（即上次PCR做成功的sample）， 然后內(nèi)參，然后各個(gè)sample。同時(shí)，為了防止我的操作手法不一致造成的誤差，我一般每個(gè)樣本做兩個(gè)孔（多一個(gè)副孔）。祝你實(shí)驗(yàn)順利，如果覺得有用的話請(qǐng)給我發(fā)金幣啊，我是新注冊(cè)者，急需金幣。另外，我在美帝讀PHD，可以幫你下免費(fèi)的文獻(xiàn)，哈哈�。� |
3樓2013-01-16 10:03:18
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