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lixuanli鐵蟲 (初入文壇)
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amisking: 金幣+5, MolEPI+1, 鼓勵(lì)積極發(fā)帖幫助解答問(wèn)題。 2013-01-19 17:56:25
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至于你的這個(gè)圖片，雖然沒(méi)有上maker，不知道大小，但條帶我覺(jué)得普遍都挺彌散，這種效果的我也遇到過(guò)（見(jiàn)圖片），但是我后來(lái)將要跑SDS-PAGE的蛋白質(zhì)樣品都加上樣緩沖液煮5分鐘，將所有制膠所用的試劑都放在4度冰箱，電泳的時(shí)候加冰降溫，之后的效果就都達(dá)到我的要求了（見(jiàn)圖片），你也這樣試一下吧。預(yù)染的maker我也跑過(guò)，我覺(jué)得效果不好，不知道什么原因，也就不再用了。不過(guò)分子量越小的蛋白質(zhì)跑得越久條帶就越彌散是很正常的（看我的圖片），可能不是用聚丙烯酰胺，用個(gè)別的什么材料來(lái)跑會(huì)壓縮得挺好，因?yàn)槲乙牡鞍踪|(zhì)分子量不很小，所以我沒(méi)有用過(guò)。 差.jpg 2012.1.2 4合MonoQ，主2、2、4天，次2、3天，不同天數(shù)合疏離前、中、后、合并變性膠.jpg |
5樓2013-01-19 01:03:51
cicelyzh
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amisking: 回帖置頂 2013-01-19 17:57:08
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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條帶不平整如果不是膠和電泳的問(wèn)題的話多半和樣品處理不好。因?yàn)槟愕膍arker也是和樣品差不多，所以問(wèn)題可能是膠做的不好或者是電泳的問(wèn)題。其實(shí)SDS-PAGE對(duì)溫度沒(méi)什么嚴(yán)格的要求，如果想快點(diǎn)看結(jié)果我都是直接200v跑biorad的mini膠，條帶一樣是sharp的。當(dāng)然如果可以用恒溫跑的話會(huì)更好。做膠的各種成分，包括丙烯酰胺、Tris buffer、SDS配好后最好過(guò)濾，保證體系很均一。 |
11樓2013-01-19 07:56:15
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