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daxiaowoniu金蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
小蝸牛被二硫鍵、巰基乙醇難住了，求救
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| 我現(xiàn)在需要把反應(yīng)產(chǎn)物中的二硫鍵斷裂，查到可以用巰基乙醇斷裂，但不知道巰基乙醇與二硫鍵的比例多少，才能保證把二硫鍵全部斷裂，巰基乙醇也不要過(guò)量太多，求 各位大仙幫忙 |
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cpumantiszj
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
daxiaowoniu: 金幣+5 2013-05-22 14:22:15
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daxiaowoniu: 金幣+5 2013-05-22 14:22:15
| 很多巰基試劑都可以斷裂二硫鍵的，DTT和你說(shuō)的巰基乙醇都行。小分子巰基試劑斷裂二硫鍵不是看用量的，而是看最終濃度的，即你的樣品如果溶解體積是10ml和20ml，所需的巰基試劑的量同樣應(yīng)該加倍（即使你樣品的量一樣）。給個(gè)參考意見(jiàn)，你把巰基試劑的終濃度定位50mM試試看，如果不行適當(dāng)增減（20-100 mM）。還原過(guò)后肯定是要有純化過(guò)程的，而且純化后的產(chǎn)品要盡快進(jìn)行下一步反應(yīng)，否則被還原的產(chǎn)品可能再次被氧化。防止二次氧化的辦法是，加巰基試劑的時(shí)候適當(dāng)加些EDTA，除去金屬離子（巰基最易被這些離子氧化），和/或讓產(chǎn)品保留一定量的巰基試劑（5-20mM）。一點(diǎn)淺見(jiàn)希望對(duì)你有幫助。 |
2樓2013-01-19 06:49:52
daxiaowoniu
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。各種崩潰啊 3樓2013-05-22 14:23:27
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