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jiapingshk

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[求助] 蛋白保存

在二十度的室溫下，原核表達(dá)的蛋白能保存多長時間？

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1樓 2013-01-23 17:09:19

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zhenwuhuang

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【答案】應(yīng)助回帖

感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1

量多，低溫冷凍干燥！

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2樓2013-01-23 17:41:32

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2樓: Originally posted by zhenwuhuang at 2013-01-23 17:41:32
量多，低溫冷凍干燥！

我是想在二十度下對蛋白進(jìn)行酶切，時間短了怕切不開，長了又怕蛋白分解，不知道蛋白能堅持多長時間。

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3樓2013-01-23 20:28:17

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cicelyzh

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【答案】應(yīng)助回帖

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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
jiapingshk: 金幣+10, ★有幫助 2013-01-24 09:50:32

引用回帖:

3樓: Originally posted by jiapingshk at 2013-01-23 20:28:17
我是想在二十度下對蛋白進(jìn)行酶切，時間短了怕切不開，長了又怕蛋白分解，不知道蛋白能堅持多長時間。...

不知道你要做什么酶切，目的是什么，酶切后又想做什么分析。一般室溫下蛋白質(zhì)也不是那么容易分解的，只是溫度高蛋白質(zhì)會慢慢變性。事實上變性的蛋白往往是蛋白酶更好的底物。這種實驗往往是在native條件下做的，雖然蛋白酶的活性降低了，但減少了蛋白自身變性影響酶切的因素。

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4樓2013-01-24 08:06:37

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4樓: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-24 08:06:37
不知道你要做什么酶切，目的是什么，酶切后又想做什么分析。一般室溫下蛋白質(zhì)也不是那么容易分解的，只是溫度高蛋白質(zhì)會慢慢變性。事實上變性的蛋白往往是蛋白酶更好的底物。這種實驗往往是在native條件下做的，雖 ...

我是想用TEV蛋白酶切一個蛋白的組氨酸標(biāo)簽，切除標(biāo)簽后用核磁共振去分析蛋白結(jié)構(gòu)，二十度切五個小時沒問題吧？

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5樓2013-01-24 09:54:21

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5樓: Originally posted by jiapingshk at 2013-01-24 09:54:21
我是想用TEV蛋白酶切一個蛋白的組氨酸標(biāo)簽，切除標(biāo)簽后用核磁共振去分析蛋白結(jié)構(gòu)，二十度切五個小時沒問題吧？...

我覺得你最好在4°C切過夜。20度當(dāng)然活性更高一點，對蛋白來說4°C更穩(wěn)定。

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6樓2013-01-24 11:58:22

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6樓: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-24 11:58:22
我覺得你最好在4°C切過夜。20度當(dāng)然活性更高一點，對蛋白來說4°C更穩(wěn)定。...

可是我的這個蛋白不好切，4°C過夜切不動呀，只能提高溫度了

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7樓2013-01-24 14:18:53

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7樓: Originally posted by jiapingshk at 2013-01-24 14:18:53
可是我的這個蛋白不好切，4°C過夜切不動呀，只能提高溫度了...

有可能的話查一查蛋白的熱穩(wěn)定性資料。有些蛋白室溫下的穩(wěn)定性也不錯的。祝你實驗成功。

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8樓2013-01-24 15:45:10

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