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北京石油化工學(xué)院2026年研究生招生接收調(diào)劑公告

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greenygreen

銀蟲 (小有名氣)

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[求助] 求助：T7體外轉(zhuǎn)錄已有1人參與

最近做的T7體外轉(zhuǎn)錄覺(jué)得效果不好，產(chǎn)率較低。膠回收之后幾乎沒(méi)啥東西了。我的模版不是PCR產(chǎn)物，而是公司合成的兩條鏈退火之后做為模版。正義鏈5‘-3’是T7 promoter序列，反義鏈3’-5‘是和T7互補(bǔ)配對(duì)的序列，后面接上要轉(zhuǎn)錄的序列。
想請(qǐng)教大家如此的模版，20ul體系加入10pmol會(huì)不會(huì)太少呢？產(chǎn)率不高還有什么原因？模版示意圖：

[ Last edited by greenygreen on 2013-1-23 at 20:32 ]

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1樓 2013-01-23 20:17:33

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real-time

至尊木蟲 (著名寫手)

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【答案】應(yīng)助回帖

★ ★ ★
kx444555: 金幣+3, 鼓勵(lì)交流 2013-10-25 10:04:09

我一直在做T7體外轉(zhuǎn)錄
但是做的不一樣，我是PCR產(chǎn)物純化后做的，濃度非常高
很可能是你的濃度不高引起的
建議你先用T7做一下PCR，純化后再體外轉(zhuǎn)錄

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一步法逆轉(zhuǎn)錄RNA多重實(shí)時(shí)熒光定量PCR課題服務(wù)QQ461749807

3樓2013-10-25 09:39:16

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zhzhemin

新蟲 (初入文壇)

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遇到同樣的問(wèn)題，求助~

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2樓2013-10-24 22:36:17

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980979990

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引用回帖:

3樓: Originally posted by real-time at 2013-10-25 09:39:16
我一直在做T7體外轉(zhuǎn)錄
但是做的不一樣，我是PCR產(chǎn)物純化后做的，濃度非常高
很可能是你的濃度不高引起的
建議你先用T7做一下PCR，純化后再體外轉(zhuǎn)錄

最近也在做結(jié)果一直不是很理想，能給一下你的轉(zhuǎn)錄體系參考嗎？

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4樓2014-01-05 09:46:22

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gyesang

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【答案】應(yīng)助回帖

你可以把這段序列，先連接到一個(gè)克隆載體上，然后設(shè)計(jì)一對(duì)引物擴(kuò)增你要轉(zhuǎn)錄的這段序列，膠回收，這是的DNA量遠(yuǎn)比你合成回來(lái)的DNA量高，再做體外轉(zhuǎn)錄，能提高產(chǎn)物得率

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學(xué)術(shù)問(wèn)題討論咨詢發(fā)郵件gyesang@163.com

5樓2014-01-05 15:29:34

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