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daniel_tang金蟲(chóng) (小有名氣)
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基因敲除中maker的方向，求討論
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?????ó??????????^????????@????°? Datsenko, K.A. & Wanner, B.L. One-step inactivation of chromosomal genes in Escherichia coli K-12 using PCR products. Proceedings of the National Academy of Sciences 97, 6640-6645 (2000). E. coli ??Keio collecton ??????@???????? ?????ó????H????????M?У???maker (?????????) ???Q???????????}??????O?primer??r??marker????????????e?O???? ?????????????Keio?e?棬marker??????????????????????N??????????????N???????paper???@???|????? ????t????Ь??????? |
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cicelyzh
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?????????marker?ǎ?promoter???????????????????_???????????????Л]?в?e?? ????4??????????????????????????DNA????? ??????keio???????????start codon????????????N?????????????pomoter????????????marker (e.g. FRT-Km-FRT cassette)????_?????a????l???L??peptide???@????????漰????a???eλ???????}??????f?@Щ???]????N?P?S????????]??????????N???? |
6樓2013-02-01 13:00:16
daniel_tang
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小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
daniel_tang: 金幣+2 2013-02-01 23:12:06
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
daniel_tang: 金幣+2 2013-02-01 23:12:06
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只有marker的promoter（medium強(qiáng)度的promoter）影響外面表型，所以最后要敲掉，糾結(jié)外面的啟動(dòng)子影響沒(méi)有意義，多表達(dá)那點(diǎn)東西99.99%也不會(huì)對(duì)篩選有影響（離啟動(dòng)子遠(yuǎn)端的基因表達(dá)水平越遠(yuǎn)越低，而且一般構(gòu)建marker會(huì)帶一個(gè)簡(jiǎn)單的terminater吧）。 敲多少，是否敲啟動(dòng)子，是否敲startcodon，是否要inframe是根據(jù)你的實(shí)驗(yàn)?zāi)康臎Q定的（比如一個(gè)啟動(dòng)子后面好幾個(gè)ORF之類(lèi)的），而不是根據(jù)paper決定的 |
8樓2013-02-01 22:07:54
daniel_tang
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