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chenxi3099鐵蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
關(guān)于ZipTip C18微量層析柱使用方法
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| 請(qǐng)教各位，有誰(shuí)用過(guò)ZipTip C18微量層析柱？對(duì)蛋白樣品純化濃縮、脫鹽等預(yù)處理，以便進(jìn)行質(zhì)譜分析。�？梢灾苯佑靡埔簶尣僮鲉�？謝謝~ |
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【答案】應(yīng)助回帖
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lovibond: 金幣+2, 鼓勵(lì)新蟲(chóng)應(yīng)助 2013-03-12 14:50:47
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Zip-Tip C18除鹽方法 準(zhǔn)備試劑：ACN，50% ACN（ddH2O稀釋?zhuān)?.1% TFA 1、 用ACN洗滌Tip 3-5次，除去雜質(zhì) 2、 用0.1% TFA洗滌Tip 5-10次，平衡 3、 用20 uL 0.1% TFA溶解抽干的肽段（或酶切后的肽段溶液），Tip反復(fù)吹吸20次，讓肽段充分吸附到Tip上 4、 用0.1% TFA洗滌Tip 3-5次，除去未結(jié)合的雜質(zhì) 5、 在新EP管內(nèi)加入20 uL 50% ACN，Tip反復(fù)吹吸10次，洗脫Tip結(jié)合的肽段 6、 用ACN反復(fù)洗滌Tip10次，除去所有雜質(zhì)，讓Tip再生。從步驟2開(kāi)始進(jìn)行新樣品除鹽 7、 如果進(jìn)行MALDI-TOF分析，在步驟5后可直接用MATRIX將肽段洗脫到點(diǎn)樣板上；如果進(jìn)行LC-MS/MS分析，將步驟5產(chǎn)生的肽段旋干，再用0.1% 甲酸溶解 注：每只Tip可處理3個(gè)樣品 另：直接用移液器操作，和小白槍頭一樣使用�；蛘吒悬S色的槍頭一樣。 |
2樓2013-03-12 14:45:22
chenxi3099
鐵蟲(chóng) (小有名氣)
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3樓2013-03-13 14:48:11
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