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cuicchao

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[交流] 質(zhì)粒提取的特殊現(xiàn)象

這是我在同一次提取質(zhì)粒時(shí)出現(xiàn)的現(xiàn)象，用的是OMEGA的試劑盒。

DSC03382.JPG

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1樓 2013-03-09 08:16:30

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cuicchao

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本來(lái)正�，F(xiàn)象應(yīng)該是第二幅圖的樣子，第一個(gè)明顯沒(méi)裂解開(kāi)菌體，這怎么回事，我想是不是挑的大腸桿菌單克隆不對(duì)勁�。�？？？？

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2樓2013-03-09 08:19:22

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2樓: Originally posted by cuicchao at 2013-03-09 08:19:22
本來(lái)正�，F(xiàn)象應(yīng)該是第二幅圖的樣子，第一個(gè)明顯沒(méi)裂解開(kāi)菌體，這怎么回事，我想是不是挑的大腸桿菌單克隆不對(duì)勁�。�？？？？

是不是菌養(yǎng)的太久了，對(duì)數(shù)期的最好提！

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3樓2013-03-09 08:56:33

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concon123456

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1.你的細(xì)菌量是不是有問(wèn)題。這種試劑盒對(duì)細(xì)菌量有要求，多了列解不開(kāi)的。
2.問(wèn)：裂解液忘加了。嘿嘿

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4樓2013-03-09 09:06:06

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cuicchao

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3樓: Originally posted by 無(wú)為書(shū)生 at 2013-03-09 08:56:33
是不是菌養(yǎng)的太久了，對(duì)數(shù)期的最好提！...

我一般都是搖12小時(shí)以上再提質(zhì)粒，這樣不好嗎？之前我就是這樣提取的

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5樓2013-03-09 09:23:53

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cuicchao

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4樓: Originally posted by concon123456 at 2013-03-09 09:06:06
1.你的細(xì)菌量是不是有問(wèn)題。這種試劑盒對(duì)細(xì)菌量有要求，多了列解不開(kāi)的。
2.問(wèn)：裂解液忘加了。嘿嘿

SOLUTION 1,2,3都加了啊。菌量是挺多了，那之前也能提出來(lái)啊

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6樓2013-03-09 09:25:50

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5樓: Originally posted by cuicchao at 2013-03-09 09:23:53
我一般都是搖12小時(shí)以上再提質(zhì)粒，這樣不好嗎？之前我就是這樣提取的...

菌太久了裂解不充分，你看看加了裂解液后菌液是否會(huì)變澄清！

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7樓2013-03-09 09:35:25

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逆天打醬油

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離心收集菌體量會(huì)不會(huì)過(guò)多？我用的試劑盒一般是3ML每管收集菌體，基本上都可以按照試劑盒操作完全裂解。

另外會(huì)不會(huì)是忘記重懸直接加了裂解液？

也許是污染了什么東東。。。。。。

沒(méi)有遇到過(guò)鹵煮這樣的情況，只是自己猜測(cè)，希望幫到鹵煮

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9樓2013-03-09 12:18:05

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cuicchao

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9樓: Originally posted by 逆天打醬油 at 2013-03-09 12:18:05
離心收集菌體量會(huì)不會(huì)過(guò)多？我用的試劑盒一般是3ML每管收集菌體，基本上都可以按照試劑盒操作完全裂解。

另外會(huì)不會(huì)是忘記重懸直接加了裂解液？

也許是污染了什么東東。。。。。。

沒(méi)有遇到過(guò)鹵煮這樣的情 ...

恩，我想多提的時(shí)候是3ml的菌體裂解液上清結(jié)合到一個(gè)柱子上洗脫的，之前這樣做挺順的，就這次出現(xiàn)了這情況。

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12樓2013-03-09 20:17:00

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呆口小俊

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溶液三加完后把蛋白沉淀打散，用點(diǎn)力沒(méi)事。你管子里應(yīng)該還有蛋白質(zhì)沒(méi)沉吧？

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14樓2013-03-10 08:55:23

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八頭小豬

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cuicchao(金幣+1): 謝謝參與

第一管里看起來(lái)像粘稠狀蛋白

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15樓2013-03-10 09:01:14

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葉偉偉99

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菌沒(méi)裂解呢！加了溶液I沒(méi)震蕩吧？

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16樓2013-03-10 09:32:22

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16樓: Originally posted by 葉偉偉99 at 2013-03-10 09:32:22
菌沒(méi)裂解呢！加了溶液I沒(méi)震蕩吧？

我加Solution1之后用槍吹打重懸起來(lái)就好了，然后再加solution2了

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17樓2013-03-10 09:47:03

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wanglei512

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如果離心以后菌體發(fā)紅，我們一般就不進(jìn)行下面的操作了，因?yàn)楦咎岵怀鲑|(zhì)粒，出現(xiàn)紅色要么是污染了，要么搖的時(shí)間太長(zhǎng)了

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18樓2013-03-10 10:14:48

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簡(jiǎn)單回復(fù)

yingying15888樓

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yingying158813樓

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