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湖畔狂想金蟲 (小有名氣)
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[交流]
蛋白體液中加甘油和蔗糖的作用是什么？ 已有3人參與
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蛋白提取液中有加甘油的，也有加蔗糖的。 請問他們的作用是什么，區(qū)別是什么？ |
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為什么是穩(wěn)定蛋白結(jié)構(gòu)呢，提取蛋白時，不是要斷開二硫鍵、氫鍵等次級鍵，破壞掉它的結(jié)構(gòu)嗎？ 這是步驟： 將材料加液氮研碎成粉末狀，加入少許PVP-40及含50mMTris-HCl(pH7．8)、10％v/v加甘油、1mM EDTANa2、lmM PMSF和2％v/v巰基乙醇的抽提緩沖液I繼續(xù)勻漿。 沉淀再用含有100mM磷酸緩沖液(pH7．1)、10％v/v甘油、200mM KCl、2mM MgS04.7H2O、1mM EDTANa2、2％w/V CHAPs、1mM PMSF和2％v/v巰基乙醇的抽提緩沖液Ⅱ懸浮起來。 輕輕搖勻30min后，加入7M Urea、2M硫脲、3mM DTT在室溫繼 續(xù)搖勻30min。再22400rpm離心3 min，取上清與上次所得上清液匯合。 對上清液中的總蛋白質(zhì)進行酚抽提，加入等體積Tris飽和酚，振蕩30min。再離心3min，15000rpm，4℃。取酚相再加入5倍體積0.1M乙酸胺(甲醇配制)，4℃靜置至出現(xiàn)沉淀為止。離心30min，15000rpm，4℃。用丙酮(含13mMDTT)洗滌兩次。最后，-40℃冰凍干燥蛋白質(zhì)成干粉狀。 求指教！ |
7樓2013-03-10 17:19:18
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2樓2013-03-10 13:41:22
湖畔狂想
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3樓2013-03-10 13:51:28
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4樓2013-03-10 13:55:01
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