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碧海行帆金蟲 (初入文壇)
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[求助]
雙酶切
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| 一個(gè)片段加上 spe1 xbal 雙連個(gè)酶切位點(diǎn)后，連到載體上，在用這兩個(gè)酶進(jìn)行雙酶切，切不開怎么辦，片段測序后，酶切位點(diǎn)沒有發(fā)生突變！ |
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gaojuan1985
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【答案】應(yīng)助回帖
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碧海行帆: 金幣+2 2013-03-14 10:53:32
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碧海行帆: 金幣+2 2013-03-14 10:53:32
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1.確定酶是正常的，切別的試試能不能切開。 2.查看在酶切位點(diǎn)及周圍上有沒有甲基化位點(diǎn)。我們有一次用BamHI，就發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)化到大腸桿菌中再提出來的質(zhì)粒，怎么也切不開了。后來發(fā)現(xiàn)是BamHI和旁邊臨近的幾個(gè)堿基形成了一個(gè)甲基化位點(diǎn)，導(dǎo)致切不開了。 |
2樓2013-03-13 16:57:52
gyesang
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3樓2013-03-13 18:46:56
4樓2013-03-13 19:35:44
碧海行帆
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5樓2013-03-14 10:08:36
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6樓2013-03-14 10:12:19
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7樓2013-03-14 10:25:41
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