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炭筆橡皮

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[求助] 單細胞PCR

我最近要做單細胞PCR，是用顯微操作獲取細胞的，吸到倒是沒問題，不過有什么方法能夠確保細胞打到Trizol里面呢？還有這個RNA提取出來以后怎么樣看提取的質量呢？我參考的protocol里面是直接進行反轉錄和PCR，可能是因為單細胞的RNA太少沒法檢測質量吧，但是這樣如果第一步的RNA都沒提到的話后面的不是白做了嗎？一點頭緒都沒有啊，求教有經驗的大蟲，感激不盡��！

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1樓 2013-03-19 09:57:04

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【答案】應助回帖

感謝參與，應助指數 +1

我也在做這個實驗，現階段是DNA的PCR，都是消化后直接擴增的，沒法檢測模板的質量，我想問問你看的是哪篇protoco，你的基因組擴增又是怎么做的？

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2樓2013-03-19 14:44:17

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2樓: Originally posted by aga0110125 at 2013-03-19 14:44:17
我也在做這個實驗，現階段是DNA的PCR，都是消化后直接擴增的，沒法檢測模板的質量，我想問問你看的是哪篇protoco，你的基因組擴增又是怎么做的？

Quantitative Estimation of Multiple miRNAs and mRNAs
from a Single Cell
Mugdha V. Joglekar,Chiju Wei,and Anandwardhan A. Hardikar
主要步驟都是按照這個來的。你做出來的結果怎么樣呢？提RNA的時候有沒有什么特別注意的？我覺得很可能單細胞RNA都提不出來

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3樓2013-03-19 15:53:41

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呼銳

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3樓: Originally posted by 炭筆橡皮 at 2013-03-19 15:53:41
Quantitative Estimation of Multiple miRNAs and mRNAs
from a Single Cell
Mugdha V. Joglekar,Chiju Wei,and Anandwardhan A. Hardikar
主要步驟都是按照這個來的。你做出來的結果怎么樣呢？提RNA的時候有沒 ...

單細胞的現在不是有很多試劑盒可以滿足你的實驗

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人生就是一個奮斗的過程，只有認真做好每一件小事，才能使成功更近一步！

4樓2013-11-16 21:21:58

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炭筆橡皮

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4樓: Originally posted by 呼銳 at 2013-11-16 21:21:58
單細胞的現在不是有很多試劑盒可以滿足你的實驗...

是啊，是有一些，不過那些試劑盒都好貴

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5樓2013-11-17 00:40:46

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kennyhas

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我只做過單細胞的DNA PCR, 我當時是把單細胞在顯微鏡下挑到96孔板里,挑完了我會在顯微鏡下看看有沒有吹打進去, 你可不可以先把細胞放進96孔里,然后再加trizol呢? 如果不行,建議你可以在反轉錄之后，real-time PCR之前，設計一對檢測非轉錄區(qū)DNA 的引物來做個PCR，這樣你就能知道里面有沒有基因組DNA在.

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6樓2013-11-17 19:57:42

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6樓: Originally posted by kennyhas at 2013-11-17 19:57:42
我只做過單細胞的DNA PCR, 我當時是把單細胞在顯微鏡下挑到96孔板里,挑完了我會在顯微鏡下看看有沒有吹打進去, 你可不可以先把細胞放進96孔里,然后再加trizol呢? 如果不行,建議你可以在反轉錄之后，real-time PCR之 ...

謝謝！我之前是把單細胞打到PCR管里然后再在顯微鏡下看，但是那個很難聚焦，基本看不出來什么，96孔板會比較明顯嗎？你做的DNA結果怎么樣？

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7樓2013-11-18 09:36:59

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7樓: Originally posted by 炭筆橡皮 at 2013-11-18 09:36:59
謝謝！我之前是把單細胞打到PCR管里然后再在顯微鏡下看，但是那個很難聚焦，基本看不出來什么，96孔板會比較明顯嗎？你做的DNA結果怎么樣？...

PCR 管里面確實是很難看到， 96孔板可以很方便觀察
我之前做DNA PCR可以做出來

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8樓2013-11-22 00:08:50

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8樓: Originally posted by kennyhas at 2013-11-22 00:08:50
PCR 管里面確實是很難看到， 96孔板可以很方便觀察
我之前做DNA PCR可以做出來...

好的，我試一下。你做DNA是提純之后再PCR還是直接在裂解液里面P？

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9樓2013-11-22 10:13:02

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maodoujie

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你做的DNA的pcr，是用試劑盒還是自己配的反應體系？

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10樓2017-04-18 21:26:32

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