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wangyuanji銀蟲 (小有名氣)
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[求助]
伊文思藍該如何檢測？
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準備檢測伊文思藍（百度：一種常用的偶氮染料制劑,因其分子量大小與血漿白蛋白相近，而且在血液中與血漿白蛋白有很高的親和力,因此在神經(jīng)科學(xué)研究中常被用于示蹤劑觀察血腦屏障(BBB)的完整性）透過血腦屏障的量，從而考察藥物對腦缺血引起的血腦屏障破壞的保護作用。經(jīng)文獻調(diào)研，發(fā)現(xiàn)多數(shù)此類文獻均用紫外分光光度法檢測（λ=600~630nm）。 樣品處理方法如下： 腦缺血大鼠經(jīng)尾靜脈注入2% EB溶液(0.4 mL/l00g體重),1 h后用3.5%水合氯醛(1 mL/100 g)腹腔注射麻醉。麻醉大鼠用生理鹽水約經(jīng)左心室灌注,至右心耳流出液體為無色。取大腦,用刀片從中間矢狀縫分為左右兩部分,稱重,分別浸入3 mL甲酰胺溶液中,于恒溫箱中孵育48 h, 3000 rpm離心8 min,上清液于620 nm波長處測定OD值。以甲醜胺溶液為空白對照。 我是這樣考慮的。血腦屏障被破壞后，在處死前靜脈注入伊文思藍，這種水溶性染料能夠進入受損的腦組織，但是進入的量會很少，所以用紫外分光光度計檢測可能靈敏度不夠，所以我想用液相法檢測，但是昨天進樣試了一下；條件如下：PDA全波長檢測，流動相甲醇-水（多種比例均試過了），柱溫30度，迪馬色譜柱（150*4.6mm，5.0μm），樣品為水溶解的，直接進樣的，沒有經(jīng)甲酰胺提取。一個小時的檢測時間，都未見有峰出現(xiàn)。 大家?guī)兔Ψ治鲆幌�，問題出在哪里了呢？ |
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wangyuanji
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