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失蹤的夏天木蟲 (正式寫手)
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[求助]
細胞加入病毒感染時，為什么要在2小時后棄去病毒液？
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最近做抗病毒很不順，細胞都被病毒弄死了，100TCID50已經(jīng)降到12.5TCID50了，細胞還是死。 仔細看文獻，說加入病毒后，放置培養(yǎng)箱里2小時后再棄去病毒液，PBS洗滌，再加入藥物。 但老師說完全可以不用棄去，省去這一步。說2小時病毒已經(jīng)侵入細胞，棄去也無意義。如果是這樣，那為嘛文獻里都要棄去呢？ 現(xiàn)在細胞一加病毒就死，指標一個都沒測。急啊急啊，有木有高人指點下啊。 貌似這樣下去畢業(yè)不了啊。。。。。。 |
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rabbitzumi
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你先做一下病毒不同稀釋度（從100TCID50開始，可以5倍或10倍向下稀釋）對產(chǎn)生CPE的影響。因為每一批病毒的TCID50值都是不準的，而且每次做實驗時的細胞狀態(tài)也不同，之前一定要做預(yù)實驗，把病毒量調(diào)好。 此外，經(jīng)典的病毒技術(shù)手冊上面貌似也是病毒吸附1-2h再洗去病毒后給藥，此時已有部分藥物吸附并進入宿主細胞，這樣做的原因可能有： 1. 這種給藥方式反映的藥物作用特點是對病毒吸附后的環(huán)節(jié)發(fā)揮抑制作用，如脫衣殼，病毒基因組復(fù)制，轉(zhuǎn)錄，翻譯，出芽，釋放等等等環(huán)節(jié)。 2. 個人認為這樣做更接近于病毒感染的真實過程，一般的宿主都是在病毒環(huán)境中暴露一定時間（這個時間足以使其被感染），而不是一直處于病毒環(huán)境中。 我做過比較，病毒吸附與不吸附兩種造成的CPE差不多，后者稍嚴重。 |
失蹤的夏天2樓2013-04-16 15:54:39
失蹤的夏天
木蟲 (正式寫手)
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3樓2013-04-16 16:30:33
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