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raindrop_mc銀蟲 (小有名氣)
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[求助]
大腸桿菌o抗原的檢測，總是不出結(jié)果，無任何凝集現(xiàn)象，著急啊
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 我是按照以下實驗方法操作的。一：血清 從中國獸藥監(jiān)察所購置，牛源常見o抗血清14種。用0.5%石碳酸生理鹽水進行稀釋。 目前稀釋1，3，5三個稀釋倍數(shù)，因為第一次做，還不確定用多大濃度。 二：抗原的制備 將大腸桿菌純培養(yǎng)物劃線接種于麥康凱瓊脂平板上，37℃培養(yǎng)18h，在小圓底試管中加入2ml0.5%石碳酸生理鹽水，用棉簽輕掛下麥康凱瓊脂上的培養(yǎng)物，置小圓底試管中，制成濃稠菌液，于121℃高壓2h，破壞莢膜（K）抗原，制成高壓抗原。 三：檢測 取高壓鍋的潔靜玻板，用記號筆劃成方格，并注明相應(yīng)血清標(biāo)號，每格用微量移液器加一種被檢菌高壓抗原20ul（上清液）和血清各20ul置玻板上混勻，5min內(nèi)出現(xiàn)明顯凝集者為“陽性”反應(yīng)。 另外中血清和生理鹽水的混合做陰性對照，還有高壓抗原和生理鹽水的混合，做自凝的對照。 我用此方法，選取了16株從9個廠區(qū)采集的大腸桿菌做樣本，做了2次試驗，均是用血清的原液（就是1倍稀釋的）做的，可是一個凝集的結(jié)果都沒有出現(xiàn)。想了想試驗步驟覺得沒問題，問了周圍的師兄弟也沒發(fā)現(xiàn)實驗步驟有什么不對勁，求解釋啊。  |
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