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意孤城_金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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[求助]
想往一個(gè)載體中插入Kan抗性基因該怎么做
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想往通過(guò)PCR方法向一個(gè)載體中插入一個(gè)Kan抗性基因（必須插入，因?yàn)橐脑燧d體，不能選kan抗性原載體）。請(qǐng)問(wèn)我PCR過(guò)程中除了要包含ATG開(kāi)始編碼Kan序列外，他的啟動(dòng)子和終止子序列該怎么尋找。NCBI上查了 沒(méi)找到。有沒(méi)有知道的 急求 |
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意孤城_
金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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5樓2013-04-02 20:37:55
酶切專(zhuān)家
金蟲(chóng) (小有名氣)
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【答案】應(yīng)助回帖
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不知你準(zhǔn)備從哪個(gè)載體上擴(kuò)增（pET系列中好像有幾個(gè)是ka抗性，可以參考）。 一般，原核的表達(dá)調(diào)控元件比較簡(jiǎn)單（啟動(dòng)子在atg上游100bp以?xún)?nèi)，終止子在TAG、TAA or TGA下游100bp以?xún)?nèi)，啟動(dòng)子一般有表明顯的-10區(qū)(TATAAT）和-35區(qū)結(jié)構(gòu)，你可以自己找一找，而強(qiáng)終止子有明顯的發(fā)夾結(jié)構(gòu)，你可以試著找一找，如果嫌麻煩，可以直接擴(kuò)增包含編碼區(qū)上下游各100bp的序列，一般就足夠了。 goodluck! |
3樓2013-04-01 22:11:59
gyesang
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4樓2013-04-02 20:31:07
gyesang
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6樓2013-04-02 20:41:34
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