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綠草如茵木蟲 (小有名氣)
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[求助]
緊急求助：酵母中GFP問題
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| 大家好，本人想做一個(gè)蛋白在酵母中的定位情況，GFP在N端與目的基因融合，在酵母中表達(dá)后，利用熒光顯微鏡觀察（融合基因證實(shí)轉(zhuǎn)進(jìn)去了），就是看不見應(yīng)該，請問是怎么回事？而對(duì)照（僅GFP連接表達(dá)載體的）有熒光，請大家?guī)兔Ψ治鰩熢趺椿厥�？不勝感激�? |
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綠草如茵
木蟲 (小有名氣)
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3樓2013-04-09 08:47:51
starseacow
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
wizardfan: 金幣+3, 謝謝分享經(jīng)驗(yàn) 2013-04-09 07:48:50
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wizardfan: 金幣+3, 謝謝分享經(jīng)驗(yàn) 2013-04-09 07:48:50
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1 樓主檢查一下構(gòu)建載體時(shí)有沒犯低級(jí)錯(cuò)誤，如終止子該不該有的問題 2 我沒搞過酵母熒光，但從做植物經(jīng)驗(yàn)看，GFP在N端還是C端有時(shí)候影響結(jié)果，樓主試試構(gòu)建一個(gè)C端的3 3 有些熒光標(biāo)記蛋白在酵母中用激光共聚焦也看不出來，上次Zeiss的一個(gè)工程師來安裝新機(jī)器，他介紹老式的LSM510看不了一些酵母的熒光結(jié)果，而他們的新LSM780就可以，樓主可以考慮換用更強(qiáng)大的機(jī)器。 |
2樓2013-04-09 00:13:14
starseacow
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4樓2013-04-09 18:22:27
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