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yipinyoulan銀蟲 (小有名氣)
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[求助]
對乳酸菌電轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)質(zhì)粒，轉(zhuǎn)了一個月老是轉(zhuǎn)不進去，求大神們指導(dǎo)！
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問題：構(gòu)建了兩個質(zhì)粒，第一個質(zhì)粒一次電轉(zhuǎn)化就轉(zhuǎn)進去了，另一個質(zhì)粒怎么轉(zhuǎn)都轉(zhuǎn)不進去 電轉(zhuǎn)條件：1、乳酸乳球菌為L.lac.NZ9000,一般是在含2.5%甘氨酸的GM17培養(yǎng)基中養(yǎng)8~9個小 時，待其OD600達到0.2以上時，做成感受態(tài)。 2、 感受態(tài)一般為100ul或40ul，質(zhì)粒一般為1ul或者2ul（濃度為~1ug/ul） 3、電壓：2.4KV或者2.5KV 脈沖間隔：~5.8ms 4、電轉(zhuǎn)化后的恢復(fù)培養(yǎng)基：GM17加適當濃度的蔗糖，MgCl2，Cacl2。 現(xiàn)象：將電轉(zhuǎn)后的恢復(fù)培養(yǎng)的菌涂到含氯霉素的GM17的抗性平板，30度靜置培養(yǎng)1~2天，甚至3天，什么都不長。 急求解釋！萬分感謝！ |
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