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ilovejim銀蟲 (正式寫手)
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[求助]
150 ng（目的基因）的雙鏈RNA樣品雜交無(wú)信號(hào)，求解答？
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各位大俠，我的雜交結(jié)果出了點(diǎn)問(wèn)題，重復(fù)兩次均得到同樣的結(jié)果，除了陽(yáng)性對(duì)照信號(hào)很亮，目的基因均無(wú)信號(hào)。 我的實(shí)驗(yàn)過(guò)程是，病毒雙鏈RNA樣品目的基因150 ng（并以探針模板——割膠回收PCR產(chǎn)物50 ng——做陽(yáng)性對(duì)照），1% TAE凝膠電泳后，凝膠置于0.5 M NaOH 1.5 M NaCl 溶液中變性15 min，換新溶液重復(fù)一次；然后 1 M Tris-HCl 1.5 M NaCl pH7.4溶液中和15 min，換新溶液重復(fù)中和一次。 然后用傳統(tǒng)上行毛細(xì)管法轉(zhuǎn)膜，轉(zhuǎn)膜溶液為20XSSC. 轉(zhuǎn)膜14 hr 后，拆除裝置，6xssc浸膜 5min。 自然晾干數(shù)分鐘后，80度真空烘箱固定膜。 后續(xù)利用Thermo的生物素探針和檢測(cè)試劑盒（即原來(lái)Fermentas的試劑盒）雜交（雜交和檢測(cè)均參照試劑盒提供的方法）。 檢測(cè)顯色后，數(shù)秒陽(yáng)性對(duì)照即產(chǎn)生信號(hào)，樣品即使過(guò)夜，也是白板一塊。 著急中，望大俠出手指點(diǎn)。 |
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ilovejim
銀蟲 (正式寫手)
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- 專業(yè): 病毒學(xué)
2樓2013-04-09 15:31:50
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