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若喬西木銀蟲(chóng) (初入文壇)
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MTT求助
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我剛上手做MTT試驗(yàn)，養(yǎng)的細(xì)胞是HepG2.有幾個(gè)問(wèn)題，希望各位高手能幫我解答。 1. 細(xì)胞計(jì)數(shù) 用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)的時(shí)候，是先計(jì)數(shù)，然后稀釋到想要的濃度，還是先稀釋到差不多的樣子再去計(jì)數(shù)啊？ 2. 96孔板接種的密度 一般大家都說(shuō)5000/孔，我按這個(gè)濃度種板后24小時(shí)仍發(fā)現(xiàn)96孔板里每個(gè)孔里的細(xì)胞長(zhǎng)的并不是很多（20%），是不是這個(gè)密度還是太低了。 3. 我種板后發(fā)現(xiàn)我的細(xì)胞長(zhǎng)的并不均勻，集中在每個(gè)孔的中間，外周幾乎沒(méi)有。這是細(xì)胞的生長(zhǎng)習(xí)性還是我種板時(shí)沒(méi)有種好啊?我種板后會(huì)學(xué)著別人把板左右上下往返移動(dòng)3下，這樣到底好不好啊？怎樣才能使細(xì)胞均勻分散在孔里面呢？ |
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【答案】應(yīng)助回帖
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1.如果是用100π平板，長(zhǎng)滿(mǎn)了的HepG2應(yīng)該是10的七次方左右，你可以根據(jù)這個(gè)數(shù)量自己考慮稀釋的倍數(shù)； 2.我們也是做有關(guān)腫瘤細(xì)胞的，一般我們鋪96孔板細(xì)胞數(shù)量在10000個(gè)/孔，而且在鋪板過(guò)程中，要將細(xì)胞迅速打到側(cè)壁上，這樣鋪的細(xì)胞比較均勻，鋪完細(xì)胞不能晃動(dòng)96孔板； |
5樓2013-04-10 16:11:59
gyesang
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8樓2013-04-10 17:25:01
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10樓2013-04-11 09:14:59
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【答案】應(yīng)助回帖
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1、首先肯定得先計(jì)數(shù)在稀釋到相應(yīng)的濃度。 2、對(duì)于接種密度這個(gè)問(wèn)題，我覺(jué)得可以根據(jù)自己所需來(lái)靈活接種，這個(gè)沒(méi)有絕對(duì)的定量。 3、對(duì)于細(xì)胞全部跑到中間去了這個(gè)問(wèn)題。我覺(jué)得這是個(gè)技術(shù)活，樓主種好后一定要輕拿輕放；或者種好后放在超凈臺(tái)靜置10分鐘左右再拿出來(lái)放在培養(yǎng)箱里面；或者左敲敲右敲敲上敲敲下敲敲再放進(jìn)培養(yǎng)箱里面。 |
2樓2013-04-10 14:19:53
gyesang
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4樓2013-04-10 16:03:19
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7樓2013-04-10 16:41:03
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