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signal128銀蟲 (小有名氣)
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[求助]
線粒體基質(zhì)中有一種酶，請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)分離純化該酶的實(shí)驗(yàn)方案?
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請(qǐng)問(wèn)下， “線粒體基質(zhì)中有一種酶，請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)分離純化該酶的實(shí)驗(yàn)方案？”， 如何進(jìn)行解答？？？ 知道的，能否給出正確的答案，謝謝！ |
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銀蟲 (小有名氣)
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3樓2013-04-11 11:20:49
ynkuaile
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
wizardfan: 金幣+3, 謝謝分享經(jīng)驗(yàn) 2013-04-11 08:04:32
signal128: 金幣+6, ★★★很有幫助, 您好!非常感謝你的回復(fù),請(qǐng)問(wèn)下,如果這個(gè)做為一個(gè)\\\"考試題目\\\",如何進(jìn)行詳細(xì)回答呢?別外,你說(shuō)的\\\"重組表達(dá)\\\",是如何進(jìn)行的呢? 2013-04-11 11:19:55
silicare: BioEPI+1 2013-04-27 17:03:58
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
wizardfan: 金幣+3, 謝謝分享經(jīng)驗(yàn) 2013-04-11 08:04:32
signal128: 金幣+6, ★★★很有幫助, 您好!非常感謝你的回復(fù),請(qǐng)問(wèn)下,如果這個(gè)做為一個(gè)\\\"考試題目\\\",如何進(jìn)行詳細(xì)回答呢?別外,你說(shuō)的\\\"重組表達(dá)\\\",是如何進(jìn)行的呢? 2013-04-11 11:19:55
silicare: BioEPI+1 2013-04-27 17:03:58
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1. 先純化完整的線粒體（細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)以及細(xì)胞膜以及其他細(xì)胞器含有的蛋白都比較多，降低這些蛋白對(duì)目標(biāo)蛋白的影響，減少雜蛋白） 2. 線粒體破膜，釋放出基質(zhì)蛋白酶。（千萬(wàn)不能用含有表面活性劑的東西） 3. 超速離心，除去線粒體膜碎片，酶存在于上清溶液中。（線粒體內(nèi)的酶大部分都位于內(nèi)膜上，除去膜碎片可以除去大部分雜蛋白） 4. 含有酶的上清液根據(jù)酶的性質(zhì)，過(guò)各種柱子。進(jìn)一步純化。 提醒：這樣得到的蛋白量多少不好說(shuō)，但工作量大。已經(jīng)確定是線粒體基質(zhì)內(nèi)的酶，為何不考慮下重組表達(dá)。從表達(dá)量與純化方式來(lái)看，重組表達(dá)占優(yōu)勢(shì)。 |
2樓2013-04-10 22:37:51
ynkuaile
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【答案】應(yīng)助回帖
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signal128: 金幣+8, ★★★很有幫助, 哦，f那么“以胰島素為例說(shuō)明蛋白質(zhì)從翻譯到具有活性所經(jīng)歷的生化事件（過(guò)程）？”，這個(gè)作為考試題，如何解答呢？ 2013-04-12 18:29:02
signal128: 金幣+8, ★★★很有幫助, 哦，f那么“以胰島素為例說(shuō)明蛋白質(zhì)從翻譯到具有活性所經(jīng)歷的生化事件（過(guò)程）？”，這個(gè)作為考試題，如何解答呢？ 2013-04-12 18:29:02
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我覺得你把我說(shuō)的話再潤(rùn)色一下比較好，我只是說(shuō)個(gè)大概�？碱}的話，這個(gè)是個(gè)綜合題，看你對(duì)蛋白的分離純化了解多少。到第四部還只是粗酶液，有待你將蛋白沉淀過(guò)各種柱子。我說(shuō)重組表達(dá)，是因?yàn)槟阏f(shuō)：線粒體基質(zhì)中有一種酶，你都知道這個(gè)酶的定位了，至少知道他的名字與其他一些性質(zhì)，克隆基因，用模式生物重組表達(dá)，這個(gè)方法比你提取，我覺得簡(jiǎn)單很多。線粒體基質(zhì)中的酶，多為氧化還原酶類，參考一些代謝過(guò)程中的酶的提取過(guò)程，能量代謝中的酶有很多在線粒體基質(zhì)，參考一下這類的文獻(xiàn)吧。 |
4樓2013-04-12 13:36:22
ynkuaile
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5樓2013-04-12 21:30:16
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