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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 動植物 » 綜合其他 » 毛狀根PCR檢測無條帶
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[求助]
毛狀根PCR檢測無條帶
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各位蟲友，最近用微量DNA提取毛狀根基因組，濃度檢測為0.177微克/微升，260/280=1.44 之后進行PCR檢測： 陽性對照 Ri質(zhì)粒（來源于A4） 陰性對照 植物基因組DNA 模板 毛狀根DNA 空白對照 PCR條件： rolC 基因(624bp)的引物:5’-CTCCTGACATCAAACTCGTC-3’， 5’-TGCTTCGAGTTATGGGTACA-3’， （1）條件：94℃，5min；94℃，40s：55℃，40s：72℃，1min，35個循環(huán)；72℃，8min （2）94℃，3min；94℃，1min：53.5℃，1min：72℃，1min，35個循環(huán)；72℃，10min rolB 基因(423bp)的引物: 5’-GCTCTTGCAGTGCTAGATTT-3’， 5’-GAAGGTGCAAGCTACCTCTC-3’， 條件：94℃，3min；94℃，50s：56℃，45s：72℃，1min，34個循環(huán)；72℃，10min PCR結(jié)果跑1%電泳，除了marker2000其他的都木有。。。。。。。 很奇怪連陽性對照都木有，我的引物是按參考文獻走的，是不是不是所有的Ri質(zhì)粒都相同？所以這個引物不適合A4呢？ 我的PCR條件是否退火溫度太高呢？我之后應該怎么辦呢？求助各位啊。。。。 |
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