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新人小玥

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【答案】應(yīng)助回帖

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8樓: Originally posted by 飄雪3889 at 2013-04-19 08:39:28
謝謝！從我的目的來(lái)看，我是要得到某種微生物里面的酶，而這個(gè)微生物的基因序列未知。我從提取mRNA、建cDNA 文庫(kù)出發(fā)，比從提取DNA出發(fā)構(gòu)建基因組文庫(kù)，要更合適些，不知道是不是可以這樣理解？...

得到酶？你是指克隆這個(gè)酶的基因么？如果這樣的話，就用RNA來(lái)做就行。至于要不要搞到建庫(kù)這么復(fù)雜呢，你再考慮一下。如果是一種酶就沒(méi)必要建庫(kù)了吧。
如果僅僅是得到酶的話，從蛋白的水平入手就行啦。那豈不是更快

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11樓2013-04-19 14:56:55

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飄雪3889

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引用回帖:

11樓: Originally posted by 新人小玥 at 2013-04-19 14:56:55
得到酶？你是指克隆這個(gè)酶的基因么？如果這樣的話，就用RNA來(lái)做就行。至于要不要搞到建庫(kù)這么復(fù)雜呢，你再考慮一下。如果是一種酶就沒(méi)必要建庫(kù)了吧。
如果僅僅是得到酶的話，從蛋白的水平入手就行啦。那豈不是更快...

但是這個(gè)微生物以及這個(gè)酶的基因序列都未知呢？我的目的是要找到這段酶的基因，并且實(shí)現(xiàn)克隆表達(dá)。

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12樓2013-04-19 15:01:20

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要表達(dá)出這個(gè)酶的蛋白質(zhì)，在無(wú)細(xì)胞的情況下完成其催化功能。

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13樓2013-04-19 15:03:07

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新人小玥

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【答案】應(yīng)助回帖

引用回帖:

12樓: Originally posted by 飄雪3889 at 2013-04-19 15:01:20
但是這個(gè)微生物以及這個(gè)酶的基因序列都未知呢？我的目的是要找到這段酶的基因，并且實(shí)現(xiàn)克隆表達(dá)。...

那你知道這個(gè)酶是什么酶嗎？

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14樓2013-04-19 15:05:53

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fanchuannan

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3樓: Originally posted by panyuzhu at 2013-04-18 20:26:03
1. 以mRNA來(lái)源的是cDNA文庫(kù)。
2. 以總RNA來(lái)源的是基因組DNA文庫(kù)。

庫(kù) 庫(kù) 專(zhuān)業(yè)點(diǎn)好不好，你以為是優(yōu)衣褲啊!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!這種答案都被采納。小木蟲(chóng)讓人捉急啊

哈哈，蟲(chóng)蟲(chóng)哥你的每個(gè)回復(fù)都是那么幽默又到位

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15樓2013-04-20 20:46:49

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panyuzhu

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16樓2013-04-20 21:19:40

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16樓: Originally posted by panyuzhu at 2013-04-20 21:19:40
本來(lái)科研就枯燥的，說(shuō)得好玩且不離本宗多開(kāi)心...

恩呢！我倒是挺期待研究生生活的

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17樓2013-04-20 21:37:32

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14樓: Originally posted by 新人小玥 at 2013-04-19 15:05:53
那你知道這個(gè)酶是什么酶嗎？...

這個(gè)知道。但是這個(gè)酶在不同的物種里面同源性并不高。

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18樓2013-04-21 17:31:38

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18樓: Originally posted by 飄雪3889 at 2013-04-21 17:31:38
這個(gè)知道。但是這個(gè)酶在不同的物種里面同源性并不高。...

那你是怎么想的呢？要建什么樣的庫(kù)，建庫(kù)之后怎么測(cè)呢？
如果知道該酶，還是同源克隆比較靠譜吧，建庫(kù)過(guò)程復(fù)雜，而且你只要一種酶，建庫(kù)之后有那么多的候選基因，你又如何選擇呢？
若是能將這酶提出來(lái)，直接打質(zhì)譜，這個(gè)更快一點(diǎn)吧。。。
不過(guò)這也是我個(gè)人想法，我也沒(méi)做過(guò)。僅參考而已，參考而已哈。。

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飄雪3889

19樓2013-04-22 03:28:38

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wangqi1107

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【答案】應(yīng)助回帖

第一：RT-PCR的模板不是RNA或mRNA,RT是反轉(zhuǎn)錄的意思，所以模板是cDNA。第二如果知道基因的cDNA序列，做RT-PCR是直接提取總RNA，然后反轉(zhuǎn)成cDNA做模板，利用特異性引物，進(jìn)行PCR就行。mRNA一般是為了建某一特殊時(shí)期的cDNA文庫(kù)用的，你可以查構(gòu)建cDNA文庫(kù)的過(guò)程。第三：直接從cDNA序列中找到基因是什么意思？一般cDNA序列就是指某個(gè)基因的cDNA序列，直接根據(jù)cDNA序列設(shè)計(jì)引物，PCR方法得到目的基因。第四：構(gòu)建cDNA文庫(kù)一般是為了研究某種處理，或者某種逆境下，生物體內(nèi)所有的RNA的表達(dá)變化，把這一時(shí)期的mRNA構(gòu)建成cDNA文庫(kù)，然后再詳細(xì)研究每條cDNA的功能。

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飄雪3889

20樓2013-04-22 10:55:28

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