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shelly9018新蟲 (小有名氣)
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[交流]
可以用什么分子技術(shù)，分析環(huán)境中微生物群體的數(shù)量啊，如底泥的微生物數(shù)量的變化 已有5人參與
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| 如題，想做底泥中細(xì)菌數(shù)量的變化，能夠用什么分子技術(shù)來實(shí)行比較好的定量呢，是不是RT-PCR可以呢，那它是怎樣做的，也是針對16rRNA基因的數(shù)量拷貝來分析的嘛?望大家提供寶貴意見和經(jīng)驗(yàn)！ |
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小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
laozuzunzhe: 金幣+5, good！ 2013-04-24 21:11:16
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
laozuzunzhe: 金幣+5, good！ 2013-04-24 21:11:16
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可以通過絕對定量PCR,即RT-PCR進(jìn)行定量檢測，不過做之前要制備對應(yīng)檢測基因的標(biāo)準(zhǔn)品 另一種做法是半定量法，將對應(yīng)基因缺失一部分制成內(nèi)標(biāo)，制備成不同梯度的內(nèi)標(biāo)樣品，將土壤DNA和不同濃度內(nèi)標(biāo)樣品混合，PCR擴(kuò)增目的基因，比較2個(gè)模板競爭性PCR產(chǎn)物的亮弱，亮度相同的結(jié)果即可定量待測土壤中微生物的量。 16S rRNA基因定量結(jié)果不是最終的微生物數(shù)量，需要除以3.4，因?yàn)椴煌⑸?6S rRNA基因的拷貝數(shù)不同，平均值在3.4左右。 |
3樓2013-04-24 19:50:46
2樓2013-04-24 18:58:44
kiruwa
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- 專業(yè): 環(huán)境微生物學(xué)
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4樓2013-04-24 21:09:23
kiruwa
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5樓2013-04-24 21:10:14
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