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consist10金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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[求助]
外源基因在SF9細(xì)胞內(nèi)優(yōu)化 mRNA二級(jí)結(jié)構(gòu)調(diào)整 kozak序列
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在HPV 18野生型L1基因序列的基礎(chǔ)上,截去C末端的32個(gè)氨基酸對(duì)應(yīng)編碼序列,統(tǒng)計(jì)出剩余序列中每種氨基酸的數(shù)目以及每種密碼子的數(shù)目,依照sf9細(xì)胞密碼子頻率表中的比例來(lái)調(diào)整相應(yīng)密碼子的數(shù)目,使之與頻率表相吻合;然后局部調(diào)整mRNA二級(jí)結(jié)構(gòu),降低其 復(fù)雜性;最后在基因起始密碼子區(qū)域添加Kozak序列。基因優(yōu)化后的序列由上海生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司進(jìn)行合成并通過(guò)EcoR I和Xba I酶切位點(diǎn)插入pFastBac1中,從而獲得pFastBac1-HPV 18 L1重組質(zhì)粒。 請(qǐng)教大家： 1. 依照sf9細(xì)胞密碼子頻率表中的比例來(lái)調(diào)整相應(yīng)密碼子的數(shù)目，是說(shuō)按sf9密碼子偏好型優(yōu)化序列嗎？我這樣優(yōu)化后起始密碼子怎么是ATG，不應(yīng)是AUG嗎？ 2. 如何局部調(diào)整mRNA二級(jí)結(jié)構(gòu)？用什么軟件？怎么使用軟件？ 3. 加入的kozak序列是GCCACC嗎？是不是用來(lái)增強(qiáng)表達(dá)的？是必須加的嗎？ 急需知道，先謝謝大家的賜教了。 |
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
consist10: 金幣+5, ★有幫助 2013-04-27 21:40:09
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2樓2013-04-27 21:01:18
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consist10(gyesang代發(fā)): 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖應(yīng)助！ 2013-04-27 21:24:39
consist10: 金幣+6, ★★★很有幫助 2013-04-27 21:40:37
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3樓2013-04-27 21:05:05
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4樓2017-08-20 13:56:23
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