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missoulmate金蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
關(guān)于夾心法Elisa測(cè)目的蛋白含量時(shí)發(fā)現(xiàn)的詭異標(biāo)準(zhǔn)曲線
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情況如下： 我用Elisa測(cè)目的蛋白的含量，酶標(biāo)儀的最大量程為4. 利用AP藕聯(lián)的2抗進(jìn)行檢測(cè)，pNPP為底物，夾心法Elsia，每次均有陰性對(duì)照和空白，每次陰性對(duì)照和空白的值均為0.1左右，沒(méi)有高于0.2的。 我做了4次Elisa，每次的R2均達(dá)到了0.99，但是每次的計(jì)算公式均不相同，分別為 y=5.408x-0.598 y=2.503x-0.223 y=1.22x-0.114 但是樣品的吸光值大都為2.0~3.0之間，這就出現(xiàn)了一個(gè)問(wèn)題，相同的樣品，在幾次實(shí)驗(yàn)中測(cè)的的含量差別很大，達(dá)到了幾倍。 這不科學(xué)啊，實(shí)在想不出來(lái)是啥原因了，希望大家能幫幫我，眼瞅明年要畢業(yè)了，還卡在這呢，拜托了。 2.7059 1.16615 0.47035 0.2509 0.17125 0.15265 0.142 5 1.5 0.5 0.166 0.056 0.0185 0.002 1.929 0.63045 0.29255 0.18095 0.1485 0.15065 0.13745 5 1.5 0.5 0.166 0.056 0.0185 0.002 1.4479 0.6022 0.3976 0.3207 0.30315 0.28825 0.27875 5 1.5 0.5 0.166 0.056 0.0185 0.002 這是3次的結(jié)果，上層是OD，下層是濃度。用OD和濃度在Excel里做線性擬合，R2還是可以的。就是不知道為什么在公式有變化的同時(shí)，樣品的OD值波動(dòng)卻不大？？？ |
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